第四章动物检疫技术.pptVIP

⑶动物接种 ⑵动物组织培养 在病毒分离培养中广泛采用的是细胞培养技术。 单层细胞培养使细胞在器皿的表面生长出一层或数层细胞，常用于病毒的分离繁殖。 悬浮细胞培养是把细胞悬浮在营养液中进行培养，这中方法可连续进行，因而用于疫苗生产。 二、病毒性传染病病原检查 (一)病毒分离培养 （样品处理、病毒分离培养） (二)病毒检查方法 1.包涵体检查 2.病毒培养性状观察 狂犬病、伪狂犬病、犬瘟热病毒病毒的包涵体。 3.病毒形态学观察 有直接电镜观察和免疫电镜技术。 4.病毒核酸检测 最常用的检测方法是聚合酶链式反应。 三、寄生虫病病原检查 (一)虫卵检查法 1.直接涂片镜检： 2.饱和盐水漂浮: 3.水洗沉淀 (二)虫体检查法 1.蠕虫虫体检查法 2.蜘蛛昆虫虫体检查法 3.原虫虫体检查法 四、PCR技术简介 (一)PCR技术的主要用途 聚合酶链式反应(PCR)：将生物材料中微量的目的DNA片段在体外扩增上百万倍，从而获得大量特异性核酸。 目前,PCR技术已广泛应用于病原微生物的微量检测、突变基因筛选、法医学鉴定等与生命有关的各个领域。 在动物检疫中,它主要用于微量样品和不完整病原的检测，尤其适用于个体极小、难于观察且难于人工培养的病毒的检测。 过去用常规检测技术几天甚至几周才能完成的试验，用该技术几个小时便可完成，这使禽流感等疫病的病原检测技术获得突破。并且该技术操作的每一步都不需要活的病毒，不会造成病原对环境的污染，对防疫有重大意义。 (二)PCR技术的原理 1.PCR反应基本成分 2.反应原理 (三)PCR技术的基本步骤 (四)特异性核酸的检出 第六节 免疫学检查技术 一、血清学检测技术 血清学检测技术是建立在抗原体特异性反应基础之上的。利用抗原抗体中已知的任何一方去检测未知的另一方，以达到检疫目的。 (一)凝集试验 颗粒性抗原（如红细胞、细菌等）与含有抗体的血清混合，在有电解质存在的条件下，形成肉眼可见的凝集块。 1.直接凝集反应 有玻片法和 试管法。 主要用于疫病的快速诊断 布氏杆菌病和猪传染性萎缩性鼻炎：平板凝集和试管凝集反应； 鸡白痢、鸡支原体病：全血平板凝集反应。 2.间接凝集反应 将可溶性抗原（或抗体）吸附于一种与免疫无关的载体颗粒表面，然后与相应的抗体（或抗原）作用，在有电解质存在的适宜条件下，发生肉眼可见的特异性凝集反应。 若以红细胞为载体，叫间接血凝试验，若以乳胶为载体，就叫乳胶凝集试验。 能检出少量抗体，其灵敏度比一般细菌凝集试验高2—8倍。 如口蹄疫、血吸虫病等多种病毒性传染病、寄生虫病的诊断。 某些病毒能选择性凝集某些动物的红细胞，这种凝集红细胞的现象称为血凝(HA)。而在病毒悬液中加入特异性抗体作用一定时间,再加入红细胞时,红细胞的凝集被抑制(不出现凝集现象),称红细胞凝集抑制反应(HI)。 HA和HI广泛应用在鸡新城疫、禽流感、鸡减蛋综合症等疫病的诊断检测中。试验在V型96孔微量反应板上进行。 3.血凝和血凝抑制试验 (二)沉淀试验 1.环状沉淀反应（阿司克里氏反应） 反应在小试管中进行，当沉淀素血清与沉淀原发生特异性反应时，在两液接触处出现致密、清晰明显的白环，即环状沉淀试验阳性。 常用于炭疽病的诊断和皮张炭疽检疫。 2.琼脂扩散反应 反应在琼脂凝胶中进行。 是马传染性贫血病、鸡马立克氏病、鸡传染性支气管炎、鸡传染性喉气管炎及鸡传染性法氏囊病常用的诊断方法。 (三)标记抗体技术 1.酶标记抗体技术 ★有免疫酶染色法和酶联免疫吸附试验(ELISA)。 ★主要特点：简便、快速、敏感、易于标准化、适 合大批样品检测。 ★是猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合症、猪弓形虫 病、猪囊虫病、猪旋毛虫病以及牛白血病、禽白血病 等疫病诊断的农业行业标准方法。 2.荧光标记抗体技术又称免疫荧光技术(IFT) 根据抗原抗体结合的特异性和标记分子的敏感性而 建立的诊断检测技术，称为标记抗体技术。 二、变态反应检测技术 主要应用于一些慢性传染病的检疫与监测，尤其适 合动物群体检疫、畜群净化。是牛结核病检疫、马鼻 疽病检疫常规方法。 ●细检查尸体体表特征及天然孔有无异常，以排除炭疽等恶性传染病。 ●患炭疽病的动物及其尸体，禁止剖检。 ●若怀疑动物死于炭疽，先采取耳尖血液涂片镜检，排除炭疽后方可剖检。 第三节 病理学检查技术 一、病理剖检检查技术 (一)对动物尸体剖检的要求 1.剖检前检查 第三节 病理学检查技术 一、病理剖检检查技术 (一)对动物尸体剖检的要求 1.剖检前检查 2.剖检时间 3.剖检地点 4.剖检数量 5.剖检术式 6.安全防护 剖检进行的越早越好，最 好在白天进行剖检。 病理解剖室或；在野外或其它检疫现场剖检时，应选地势高燥并远离居民区、