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临床检验中化学发光免疫研究应用探究 【摘要】化学发光免疫分析是将化学发光与免疫分析方法 相结合的产物，是目前最先进的标记免疫分析技术，结合了 化学发光的高灵敏度和免疫分析的高选择性，被广泛应用到 临床检测和药物分析中。随着新固相材料的研制，新的发光 试剂的产生，以及新的标记技术应用，化学发光免疫分析方 法的灵敏度和现性大大提高，被更加广泛的应用到临床检验 中。 【关键词】化学发光；免疫分析；临床检验 在临床检验中常需要对各种表征性的物质进行检测分 析来判断疾病或其他身体病理特征，电化学发光免疫分析技 术（ECLIA）是电化学发光和免疫测定相结合的产物，是目 前最先进的标记免疫测定技术，能对各种物质进行快速分 析，该系统是由于在电极表面由电化学引发的特异性化学发 光反应，在分析化学中，化学发光是当基态分子吸收化学能, 反应中释放的能量跃迁到激发态，使得处于激发态的分子以 光辐射的形式返回到基态时产生的光。ECLIA检测法具有灵 敏度高、准确度高、检测速度快等特点，特别适用于微量物 质的测定。 1化学发光免疫分析的工作原理 化学发光免疫分析根据发光体系在免疫分析中的表现 方式不同可分为：直接标记发光物质的免疫分析、电化学发 光免疫分析和酶催化化学发光免疫分析。其中电化学发光免 疫分析技术(ECLIA)是目前最先进的标记免疫测定技术， 能对各种物质进行快速分析，灵敏度高，目前在临床中的应 用极为广泛，可以检测细菌及病毒、检测肿瘤标志物和检测 激素等。不同的发光体系他们的作用原理也不尽相同。 1. 1直接标记发光物质的免疫分析该方法是直接用化学 发光剂标记抗原或抗体。标记的常用化学发光物质有叮噪酯 类化合物，卩丫噪酯类是有效的发光标记物，首先起动发光试 剂然后试剂作用而发光，强烈的直接发光在1秒内完成，为 快速的闪烁发光。叮唳酯因为其化学反应简单、快速、无需 催化剂，而作为标记物用于免疫分析；在检测小分子抗原时 通常采用竞争法，而大分子抗原则通常采用夹心法，不会因 为与大分子结合而影响发光量。有人已经采用直接化学发光 技术进行的全自动双抗夹心免疫测定方法，对患者血清 B-HGC含量进行检测法，操作简便、敏感度高、特异性强、 优于一般的酶联免疫法和放射免疫法[l]o 1. 2电化学发光免疫分析电化学发光免疫分析在电极表 面进行反应，用三丙胺来激发光反应发光底物通常为三联毗 唳钉。在阳极，这两种物质可同时失去电子，发生氧化反应。 在电极板上三丙胺也在电极板上被氧化成三丙胺阳离子，与 此同时二价的三联毗除钉被迅速氧化成三价三联毗噪钉。激 发态的二价三联毗噪钉在衰减的同时发射一个光子，然后重 新回到基态二价三联毗唳钉。这一过程在电极表面反复进 行，产生高效、稳定的连续发光，并不断增强。电化学发光 免疫分析采用一种新型生物反应放大系统即链霉亲和素和 生物素包被技术。以直径为218um的磁性球作为载体，比 板式的反应面积扩大了 20-30倍，利用生物素与链霉素亲和 素的牢固结合力，结合免疫放大能力和反应系统中的磁分离 功能，使免疫反应在微球表面快速进行。并且，因为电发光 过程产生许多光子，使光信号得以增强。因此，检测灵敏度 提高，线性范围也可达6个数量级，可达到检测浓度小于 lPmol/L的超微量物质。有人已经采用电化学发光免疫分析 法在检测乙肝标志物，结果发现用电化学方法检测灵敏度更 高，专属性更强［2］。 1.3酶催化化学发光免疫分析从标记免疫方面分析，酶 催化化学发光免疫分析应属酶免疫分析，只是酶反应的底物 是发光剂，因此与酶免疫分析的操作步骤完全相同：以酶标 记生物活性物质进行免疫反应，免疫反应复合物上的酶再作 用于发光底物，在信号试剂作用下发光，用发光信号测定仪 进行发光测定。例如常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP) 和碱性磷酸酶(ALP),它们有各自的发光底物。碱性磷酸酶 所用底物为环二氧乙烷衍生物，用于化学发光酶免分析底物 而设计的分子结构中包含起稳定作用的基团-金刚烷基，其 分子中发光基团为芳香基团和酶作用的基团，在起动发光试 剂作用下引起化学发光。冯艳铭等采用双抗体异位点夹心法 [3],用甲胎蛋白单克隆抗体作为固相包被，采用改良过碘 酸钠法进行甲胎蛋白多克隆抗体与碱性磷酸酶偶联制备酶 标抗体，以CSPD作为底物，建立了人血清AFP的化学发光 免疫定量分析法。 2化学发光免疫分析在临床的应用进展 2. 1检测细菌及病毒细胞的是一切生命活动的基本组成 单位，人体就是由千千万万的细胞集合而成，每个细胞就是 一个独立的小生命，而控制着细胞的核心物质就是核酸，核 酸是遗传物质基础，具有贮存、传递和表达遗传信息的功能。 因此对标本中的核酸进行定量检测，对于临床准确、及时的 诊断疾病，监测治疗效果是十分必要的。传统采用普通的细 菌培养方法