激光共聚焦显微镜LSM710入门与提高.pdf

激光共聚焦显微镜（LSM710）入门与提高 （复旦大学遗传工程国家重点实验室内部使用） 作者：韦有衡 完成于2013 年9 月 生命科学学院 遗传工程国家重点实验室 编者说明 本操作指南是应很多同学的要求，积累了3 年多的实际拍摄经验 撰写而成，主要的服务对象是使用激光共聚焦显微镜的初级用户。因 为考虑到图片的版权问题，本指南没有结合实例对一些高级复杂的功 能进行展开，故而在同学们有特殊需求的时候，请直接联系本人。 本指南的所有文字均为本人经验积累所写，非翻译或复制而成； 所有指示性图片均为本人绘制而成，故而，本指南中难免有不足之处， 欢迎广大师生批评指正！ 韦有衡 2013 年9 月 特别申明 本操作说明为复旦大学生命科学院内部使用资料，不得复制、转 载作为商业用途，违者将追究其责任！ 2 国重平台 211 设备组 韦有衡 生命科学学院 遗传工程国家重点实验室 目录 一、 安全注意事项……………………………………………5 二、 显微镜的使用与注意事项………………………………5 三、 普通荧光显微镜与共聚焦显微镜成像原理的区别……8 四、 显微镜的分辨率和放大倍数……………………………9 五、 共聚焦显微镜的开机与关机（LSM710 ）…………… 10 六、 激光共聚焦显微镜的配置和使用注意事项……………12 七、 目镜观察和显微镜拍照模式的相互切换………………14 八、 初次开机如何实现目镜观察……………………………15 九、 Acquisition 模式下各种按钮和图表的说明……………16 十、 光路设计 Smart Setup 模式…………………………… 24 十一、 如何获得一张三色图像（红，绿，蓝）………… 25 十二、 Z-stack 拍摄（三维重建）…………………………26 十三、 Time Lapse 拍摄…………………………………… 27 十四、 FRAP （光活化，光漂白）…………………………29 十五、 Fret （能量共振转移）………………………………30 十六、 蛋白共定位……………………………………………35 十七、 光谱拆分………………………………………………35 十八、 图像显示区常用参数的设置和意义…………………38 十九、 光密度值的测量与计算………………………………40 二十、 图像的保存与关闭……………………………………41 二十一、查找图像信息…………………………………………42 3 国重平台 211 设备组 韦有衡 生命科学学院 遗传工程国家重点实验室 二十二、图像是否过度曝光……………………………………42 二十三、如何调用原有的设置参数……………………………43 二十四、如何实现图像的开关…………………………………43 二十五、图像的平移、放大、缩小与旋转……………………44 二十六、如何添加标尺，如何测量图像中两点的距离………46 二十七、图像截取………………………………………………48 二十八、图像如何导出…………………………………………48 二十九、文件刻录………………………………………………49 三十、 共聚焦显微镜可以实现的功能………………………50 4 国重平台 211 设备组