云大 发酵工程实验结果以及分析.ppt

答：在已报到的谷氨酸生产菌中，除芽孢杆菌外，它们都有一些共同特点。革兰氏阳性，菌体为球形，短杆至棒状，不形成芽孢。没有鞭毛，不能运动。需要生物素作为生长因子，在通气条件下才能产生谷氨酸。 实验器材：铁铲，三角瓶，试管，吸管，培养皿，摇床，发酵罐，高压灭菌锅，牛皮纸袋，量筒，酒精灯，涂布器，接种针。 选择培养基：琥珀酸钠2g，磷酸氢二钠1.6g，7水硫酸镁0.6g，脲5g，生物素30微克，硫酸铁和硫酸锰各2mg，水1.0L，pH7.0~7.2 初筛培养基：葡萄糖 12%，玉米浆0.8%，磷酸二氢钾0.2%，硫酸镁0.04%。pH7.0 复筛培养基：葡萄糖18%，玉米浆0.5%，甘蔗糖蜜0.15%，磷酸二氢钾0.2%，硫酸镁0.04%，pH7.0 实验步骤：a.产谷氨酸菌为细菌，则采集田园土为好，做土壤浸出液，有限稀释并牛肉膏蛋白胨培养基平板涂布培养，依据菌落特征挑出产谷氨酸菌，斜面纯化培养（也可直接用选择培养基选择出产谷氨酸菌）b.初筛:上面纯化的菌株有多种，每株两瓶分三批进行初筛。放瓶后，测定谷氨酸含量。从中选出产量较高的6株左右，摇瓶培养。c.复筛：经初筛选出的6株，继续进行摇瓶复筛实验，发酵周期46h，以生产菌作为对照，共进行了3次对比试验，选出产谷氨酸最高的两株。d.发酵罐发酵，并检测产物。方法有：从发酵液中提取谷氨酸一般用等电点法，离子交换法，金属盐沉淀，盐酸盐法和电渗析法。菌体鉴别用革兰氏染色法（培养基同复筛） 实验二 柠檬酸产生菌的分离及筛选 1.察氏-加酸培养基上菌落生长情况 2.察氏-多民培养基上菌落生长情况（产酸情况） 1.由实验结果1可知，黑曲霉在察氏-加酸培养基上生长快，且生长状况比青霉菌好太多，这两种菌均耐酸，但青霉菌耐酸能力明显比黑曲霉弱的多。 2.由实验结果2可知： a.编号4是无污染中比值最大的，而所有培养基中比值最大的为编号1。但其未接种时培养基已被产酸菌污染，污染菌和接种菌来源不同，很可能不是同一菌种，因此应用编号4作为摇瓶初筛用菌株。其固体培养时产酸能力较强。 b.青霉菌不产酸，但可以在察氏-多民培养基上缓慢生长，可能是对碳源的利用不好，或之前在很低PH下菌种受损。 c.编号1的污染是倒培养基时，被空气中杂菌污染；编号5的污染可能是接种针较长，接种时弹落孢子。从而出现多个菌斑。 d.在固体培养基中产酸能力与液态培养基中存在差异，在固体培养基上产酸能力强，在液体培养基中不一定强。 1.黑曲霉柠檬酸产生菌菌株富集应考虑利用哪些特征来进行富集？ 答：a.温度，培养温度应适宜其生长 b.培养条件适宜，C源的利用，对其他菌有筛选效果 c.pH，因黑曲霉耐酸性很高，因此可以利用低pH的培养基，来排除杂菌污染，并纯化富集。 d.利用固体点植在察氏-多民培养基上纯种筛选富集。 2.观察记录在察氏-加酸培养基上菌落生长情况。 答：见实验结果1 3.观察记录所挑选察氏-多民培养基平板上变色圈和菌落直径比值 答：见实验结果2 2.发酵产物定量测定结果（NaOH溶液滴定起始刻度均为0.00） 3.柠檬酸的定性检测结果 a.点样时 自 应点14下，2112应该点5下 b.设溶质的最高浓度中心至原点中心距离为d，溶剂前沿至原点中心的距离为L 图中编号“自”在本组实验中没有出现最高浓度斑，借鉴的其他组的 c.实际比例图 1.实验结果1中，有菌膜是因为药瓶培养时间过长造成的；菌粒为小球状则可能与摇瓶时流体作用有关，球状有较大的表体比，便于利用营养，其状态与固体培养基不同；编号“自”产生黑色孢子是因为摇瓶时一部分瓶壁处于时液时固状态，故能是黑曲霉产生孢子。 2.实验结果2，滴定时应注意溶液颜色变色后深浅统一，本次实验中，同一样液消耗的氢氧化钠溶液差异稍大，可能是滴定时的误差，结果颜色深浅度不同。产酸量与开始时接种菌种有明显关系。 3.实验结果3分析：点样次数是按与标准酸液算出的比例。此次求得 值比理论 值要大，尤其是苹果酸和柠檬酸，造成这一结果的原因可能是：展开剂配比不准确，使极性偏大，人为取样存在误差；环境温度也会对其造成影响，应控制温度在合适值，保持恒定；还有可能薄层厚度存在轻微差异，不均也会影响结果；样品的用量也会造成值得改变，样品太少，斑点不清楚，无法观察测量，量太多，出现斑点太大或拖尾，不易分开，并且两者均给测量带来一定困难，很容易出现误差。编号“自”未出现最高浓度中心及斑点，原因可能是样液太稀，点样次数不够，点样次数较多可能造成斑点直径过大，展开时，部分没入展开剂中，而溶于其中，造成样液流失，还有可能点样时刺破薄层，造成一定损失。 1、绘制层析图并计算各样品的Rf值，判断发酵液的产物。 答：见实验结果3，发酵液产物Rf值和标准