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北京伯奥克生物技术有限公司蛋白指纹图谱SELDI实验技术服务 一、简介： 北京伯奥克生物技术有限公司拥有较为成熟的SELDI-TOF-MS技术，用于快速而有效地对蛋白样品进行分离、处理、数据分析和鉴定；建立蛋白质组数据库、发现疾病的相关蛋白和具有重要应用前景的生物标记分子、建立疾病的早期诊断和治疗监测方法。中心拥有的大规模基因组学测序与研究平台和生物信息学技术平台是蛋白质组学研究的重要保证。我们依靠中心实验室内所有的仪器，为广大科研工作者提供先进的服务——蛋白质样品SELDI-质谱-数据处理分析。 二、设备仪器： Ciphergen? SELDI-TOF-MS (Surface Enhanced Laser Desorption Ionization, time-of fight mass spectrometry)表面加强激光解吸电离飞行时间质谱仪(蛋白质指纹图谱仪) ProteinChip SELDI系统用于从大量复杂生物学样品中快速获得蛋白质分子量图谱，发现Biomarker。它使用表面增强的激光解吸离子（Surface Enhanced Laser Desorption/Ionization）技术来捕获、检测和测量复杂生物样品中的肽段和蛋白质的分子量。 Bruker Daltonics solarix? FTMS solarix—— 新一代杂联Qq-FTMS系统，体现了质谱能力与扩展性能核心技术提高的顶峰。这些技术提高包括：超高的灵敏度 、无可匹敌的质量准确度和宽谱分辨率 、宽范围结构解析工具包括电子转移解析(ETD) 、扩拓的质量范围 、选择性离子富集和强化的动态范围 、针对应用的优化解决方案包。solarix 系列代表了最新的FTMS，是目前市场上最灵敏、最准确、最高分辨力和最宽动态范围的仪器。 solarix 家族也拥有无与伦比的兼容性和超出其他所有仪器的客户定制能力，可与ETD等多种配件结合使用。 三、测试范围：针对血清、血浆、体液、组织、真菌、细菌、细胞培养物以及植物等样本的差异蛋白质组研究，以蛋白质芯片为载体，通过对目标疾病样本组及对照组之间进行鉴定，以期找到能够区分不同组别的差异峰，并通过对差异峰进行蛋白质鉴定，期望找到与目标疾病密切关联的基因/蛋白 四、蛋白质芯片操作流程图 SELDI蛋白质芯片的使用包括四个步骤： 步骤一：芯片类型的选择 蛋白质芯片提供了多种色谱的功能，包括亲水、疏水、阳离子交换、阴离子交换以及金属亲和表面等。此外，通过共价偶联选定的蛋白质或者其他目标分子，可以对芯片表面实现预活化，从而设计出具有更高针对性、特异性的芯片。 步骤二：上样 血清、细胞或者组织的裂解液、尿、脑脊液，或者其他蛋白质匀浆液等复杂的生物学样品——包括那些含有高浓度盐离子和去垢剂的样品——都可以直接上样于蛋白质芯片表面。样品通过手工加样或者自动上样仪进行点样。复杂蛋白质样品中的一个特定亚群将通过简单的化学作用或者蛋白质相互作用被芯片捕获。 步骤三：未结合成分的洗脱 孵育后，未结合的蛋白和其他成分从芯片表面洗脱掉。只有那些特异性结合的蛋白质才保留下来用于进一步的分析。这种选择性的洗脱进一步选取基于芯片特色的蛋白质集合。 步骤四：在SELDI蛋白质阅读机上进行分析 在洗脱步骤之后，点加上含有能量吸收分子（EAM）的有机溶液。EAMs对样品的离子化起关键作用。在蛋白质溶解到含有EAM的溶液之后，溶液挥发掉，在芯片表面形成蛋白质和EAMs的共结晶。 芯片在SELDI阅读机上进行分析，后者是一种时间飞行质谱。芯片阅读机内有一个氮源的激光器，导致离子化和解吸附过程的产生。激光能量诱导蛋白质离子化以及从晶体态到气态的转变。 一旦进入到气态，带电蛋白质分子在一个分离电压作用下迅速地运动，或称“飞行”。分离电压对样品中所有的分子具有相同的作用，使之表现出基于分子量差别的不同飞行时间。SELDI阅读机记录下这些飞行时间，换算成分子量。 五、送样须知： 1、样品来源：以血清为例，采集临床病人及正常人血清，并做好临床资料的收集。采样数量每组30例以上（统计要求），一般情况下病人样品与正常人样本相等，也可以病人样品略多于正常人。其他标本（如组织细胞裂解液）请自行蛋白浓度测定后送检。 ?2、寄送要求：蛋白质条带和干粉冰袋包装寄送，蛋白质溶液干冰或液氮包装寄送，请告知运单号我们会安排专人接收。北京本地客户可上门收样。 注：样本应避免各类污染和反复冻融。 六、检测报告： 从收到样品起5个工作日内可给出样品的检测报告，以电子邮件的形式发给您并附带检测结果分析。包括结果有：质谱图原始数据、肽段分子量、数据库检索结果；?基于SPSS和BPS分析软件对实验得出的原始质谱数据进行分析，分析项目包括原始数据的分布情况分析、差异峰