dna精萃工厂-水果的dna萃取-及人中学.pdf

中央研究院高中生命科學研究人才培育計畫 專題研究報告 DNA精萃工廠-水果的DNA萃取 作者：黃崇瑋 指導老師：武陵高中 許根火 老師 本班學號：95059 學校：國立武陵高級中學 壹、摘要： 高中生物實驗中有一項為植物的DNA粗萃取，不但沒有疾病威脅又方便操 作。因此我們想利用 DNA吸光值的定量方法，找出最有效率，使得抽取之DNA 純度最高的一系列步驟。控制不同的反應條件，發現以鳳梨汁處理火龍果可抽 取出最純的 DNA，而溫度對DNA純度的影響不大，反應時間十分鐘效果最好，現 榨鳳梨萃取液濃度25%為最佳 。另外，將鳳梨萃取液過濾後可去除較多的殘渣， 去除果楂不穩定的影響，而過濾後的鳳梨萃取液在濃度100%時反應效率最佳， 較未過濾時更能顯示出濃度間的差異，因此建議使用過濾後的水果萃取液。 貳、前言： 研究動機 依據高中三年級的 DNA粗萃取實驗，DNA的萃取來源大多都是用雞血，是因 為雞血的紅血球具有細胞核，所以可以從中萃取出足量的 DNA，以供觀察。至於 為何不用猪血來做實驗呢？是因為哺乳類的血液中的紅血球不含細胞核，雖然 白血球有核，但其細胞數量遠比紅血球少，能萃取出的DNA量根本不足我們肉 眼觀察。雞血的取得還算方便，但是最近禽流感橫掃全球，使得人心惶惶，對 於家禽、鳥類不免心生恐懼。所以我們想找出能代替雞血的材料來萃取 DNA，改 善這個實驗，想來想去就是植物(水果)了。 水果不但取得比雞血還便利，也不會有血腥味、傳染病的問題，而且其細 胞也大多具有細胞核，所以應該是個很理想的替代方案。經過上網、翻閱書籍 找資料，並動手做實驗，發現火龍果很適合萃取 DNA，而且抽取出來的量很多， 但是所萃取出來的DNA並不純，會有蛋白質纏繞。不過，有些水果所含的水果 酵素可以分解這些蛋白質，所以我們想藉由找出最好的水果蛋白酵素，來萃取 出最純的DNA。 研究目的 一、 比較各種水果萃取液在相同條件下，其所能從火龍果中萃取出的 DNA 量多寡及純度高低。 二、 找出最好的水果萃取液做為蛋白分解酶，再藉由改變各種變因，如：溫 度、濃度、反應時間、萃取液是否過濾，以最佳的條件萃取出最純的 DNA。 1 參、材料與方法 實驗器材與藥品： 一、新鮮的火龍果 八、 無菌操作台 十五、 吸量管 二、5M食鹽水 九、 磁攪拌器及攪拌子 十六、 量筒及燒杯 三、2M食鹽水 十、 錐形瓶及軟木塞 十七、 水果刀 四、清潔劑(洗碗精) 十一、 紗布 十八、 漏斗及容量瓶 五、冰的95%酒精 十二、 果汁機 十九、 蒸餾水 六、各種不同水果酵素 十三、 電子秤 二十、 鴨舌板 七、分光光度計及石英管 十四、 紗布 二十一、碼表 實驗原理 一、 大部分清潔劑都含有 sodium lauryl sulfate(十二烷基硫酸鈉)，作用 是溶掉磷脂質(細胞膜及各種胞器的膜)。 二、 水果中的一些酵素(蛋白質分解酶)可以分解與 DNA 纏繞在一起的蛋白 質，進而把 DNA分離開來，便可得到較純的 DNA 。