植物愈伤组织培养及其应用-本科实验报告.doc

本科学生实验报告 学号 124120439 姓名 牟兴玲 学院 生命科学学院 专业、班级 12级生物技术 实验课程名称 植物愈伤组织培养及其应用 指导教师及职称 郝大海 开课时间 2014 至＿ 2015 学年 上 学期 填报时间 2014 年 12 月 16 日 云南师范大学教务处编印 实验名称：植物愈伤组织培养及其应用 实验时间：2014年9月至2014年12月 小组合作： 是 一、实验预习 1‘实验目的 （1）、掌握培养基母液配制方法 （2）、掌握培养基配制方法 （3）、熟悉无菌材料继代、繁殖操作 （4）、熟悉愈伤组织诱导、再分化技术 （5）、熟悉试管苗移栽、定植技术 2、实验设备及材料 （1）、仪器设备：高压蒸汽灭菌锅、洁净工作台、循环水式真空泵、电子天平、酸度测定仪、光照培养箱,搪瓷杯、搪瓷盘、100 ml三角烧瓶（12个/组）、150 ml三角瓶、试剂瓶、剪刀、长镊子、培养皿、移液管、漏斗、量筒、烧杯（50、100、500、1000 m1），酒精灯、火柴、玻璃棒、吸耳球、封口薄膜、线绳、牛皮筋、脱脂棉、滤纸、pH试纸（5.4-7.0）、标签纸、称量纸、药勺等。 （2）、试剂：95%酒精，1N NaOH，1N HCl，硝酸铵，硝酸钾，氯化钙，磷酸二氢钾，硫酸镁，硫酸锰，硫酸锌，氯化钴，硫酸铜，钼酸钠，碘化钾，硼酸，Na2EDTA，硫酸亚铁，盐酸，盐酸吡哆素（VB6），盐酸硫胺素（VB1），肌醇，甘氨酸，蒸馏水。 （3）MS继代培养基的配制及灭菌 仪器：pH试纸、电磁搅拌器、电炉 用具：高压灭菌锅、微量移液器、移液管、量筒、容量瓶、培养瓶（三角瓶）、烧杯、标签 试剂：配制MS培养基的各种母液、生长调节剂、琼脂、蔗糖、蒸馏水、1 N NaOH，1 N HCl 实验原理及实验流程或装置示意图： （一）植物组织培养是指植物的任何器官、 组织或细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和植物生长调节物质等组成的培养基中，使其生长、分化并形成完整植株的过程。其理论依据是植物细胞具有全能性。 母液配制：在植物组织培养工作中，通常先配制一系列母液，即贮备液。所谓母液是欲配制液的浓缩液，这样不但可以保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取，而且还便于低温保藏。 （二）培养基成分：水、无机盐、有机物、植物激素、培养体的支持材料、其他辅助性物质 （三）灭菌 （1）有菌的区域是：凡是暴露在空气中的物体，接触自然水源的物体，至少它的表面都是有菌的。因此，无菌室未处理的地方、超净台表面、简单煮沸的培养基、我们使用的刀、剪在未处理之前、我们身体的整个外表及与外界相连的内表，呼出的气体、培养容器无论洗得多干净等等都是有菌的。 （2）菌包括细菌、真菌、放线菌、藻类及其他微生物。 （3）无菌的区域：经高温灼烧或一定时间蒸煮过后的物体，经其他物理的或化学的灭菌方法处理后的物体(当然这些方法必须已经证明是有效的)，高层大气、岩石内部、健康的动、植物的不与外部接触的组织内部，强酸强碱，化学元素灭菌剂等表面和内部等等都是无菌的。 （4）灭菌是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，即把所有生命的微生物全部杀死。 （5）消毒：指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。显然经过消毒，许多细菌芽孢、霉菌的厚垣孢子等不会完全杀死，即由于在消毒后的环境里和物品上还有活着的微生物，所以通过严格灭菌的操作空间(接种室、超净台、等)和使用的器皿，以及操作者的衣着和手都不带任何活着的微生物。 （6）在这样的条件下进行的操作，就叫做无菌操作。 （7）无菌操作 ①、用于无菌操作的器械采用灼烧灭菌 ◆用前干热灭菌：160-180℃,1.5-2.0h ◆用前湿热灭菌：121℃, 20-30min ◆接种前用酒精棉球擦试，浸入75%酒精液中，并在酒精灯火焰上灼烧灭菌。 ②、玻璃器皿及耐热用具采用干热灭菌 ◆干热灭菌：烘箱加热到160-180℃,1.5-2.0h ◆湿热灭菌：121℃, 20-40min ◆接种前用酒精棉球擦试，并在酒精灯火焰上灼烧灭菌。 ③、空间采用紫外线和熏蒸灭菌 ◆紫外灯照射(接种室、超净台、接种箱)：波长260nm，距离小于1.2m，20-30min。 ◆臭氧灭菌机：1-2h ◆熏蒸灭菌：5-8ml/m3甲醛+5g/ m3 高锰酸钾；冰醋酸；1-3%高锰酸钾或3%来苏儿。 ◆接种台喷雾消毒：75%酒精。 ④、实验服、