利用反向 PCR 鉴定沼泽红假单胞菌中野生质粒.pdfVIP

第49卷第1期 大连理工大学学报 Vd．49。No．1 009 200 Jan．2 9年1月 of of JournalDalian UniversityTechnology 利用反向PCR鉴定沼泽红假单胞菌中野生质粒 宋智勇， 曲媛媛。， 周集体 (大连理工大学环境与生命学院，辽宁大连116024) 摘要：为准确研究沼泽红假单胞酋的野生质粒及其携带的基因信息，在常规碱裂解法基础 ASl．2352中野生质粒提取方法进行了 上。对沼泽红假单胞茵Rhodopseudomonaspalustris 优化，优化方法具有易操作、耗时少、纯度高等特点．所得质粒DNA纯度和质量均满足进一 步分子操作的需要．同时。利用反向PCR技术鉴定该野生质粒，并结合生物信忠学方法对其 进行分析。比传统的质粒丢失法验证和考察质粒更为省时、可靠和直观．证明菌株携带4个野 coli Rom-like OA pECl57 proteingene有97．8 生质粒，其中2．3kb的质粒序列与Escherichia 的同源性，推测1885～1887碱基为复制起点． 关键词：反向PCR；野生质粒；沼泽红假单胞菌；质粒提取 中图分类号：X172文献标志码：A O 引 言 本文提出将其用于鉴定目的DNA样品是否为环 形(质粒DNA)的新思路，以期为其他种属菌株中 沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonaspalustris 野生质粒的鉴定提供参考． 广泛应用于C02固定、产氢、污水处理，产饲料用蛋 白质、色素以及可生物降解塑料(poly-hydroxy- 1实验材料与方法 butyrate)等生物质[1q]．目前，关于该菌属基因层 1．1菌株及培养 面的研究大多数集中于产色素基因及其编码蛋白 沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonaspalustris 等[63．本实验室对沼泽红假单胞菌 ASl．2352购自中科院微生物研究所，于LB培养 ASl．2352固定 Rhodopseudomonaspalustris 基中[9]，30℃，好氧培养． C02和偶氮染料脱色等方面开展了较为深入的 1．2主要试剂 研究[1]，考察了C02固定基因(GenBank Marker、 所需试剂均为分析纯，酶制荆、DNA AYl55466)相关性质．而质粒DNA作为一个重 DNA回收试剂盒等购自宝