电离辐射的细胞效应__培训课件.ppt

? PCD (programmed cell death）（程序化细胞死亡)： 在机体生理过程中，在一定信号的启动下， 凋亡相关基因有序地表达，制约着对整体无用的 或有害细胞的清除，因此，这种活动被命名为 PCD ? ? ? 二、细胞凋亡（apoptosis） （二）细胞凋亡的特征及判定方法 1．反映细胞形态改变的方法 (1)细胞染色：凋亡细胞发生了一系列的形态 改变，如体积缩小、核固缩、染色质凝集等都 可以细胞染色明显地观察出来。 (2)电镜观察：利用电镜可观察细胞的超微结 构，能同时反映细胞膜的完整性、胞浆中细胞 器、细胞核和染色质的改变，以及凋亡小体的 形成。 ? 2．生化指标 DNA ladder 流式细胞仪分析 Tunel 原位凋亡检测 二、细胞凋亡（apoptosis） （三）细胞凋亡的基因调控 ①细胞增殖抑制基因 [p35、p53、 RB、DOC（与粘附分子类似基因）、WT-1 1、促进细胞凋亡的基因 （wimls tumor type-1）、DAD 1、等] [自杀基因（suicidal gene） 凋亡蛋白，凋亡基因] ②细胞凋亡促进基因（APO-1/Fas、TGF-β、SP2、Bax 、c-rel、Bel- XS、Bak） 2、抑制细胞凋亡的基因 ①促进细胞增殖的基因（c-myc 、c-eld 1、ras、 v-src） （生长基因/抗凋亡基因） ②抑制细胞凋亡的基因（Bcl-2、EIB 、LMW-5-HL、C-Kit 、Bel-XL） 第四节 细胞存活的剂量－效应关系 ? ? 一、细胞存活的概念 存活细胞（survival cell）&死细胞 （death cell） 对于有增殖能力的细胞，保留其增殖能力，无限 产生子代的细胞为存活细胞。凡失去增殖能力， 不能产生大量子代的细胞，称为死细胞； 对那些不再增殖的已分化的细胞，则以其是否丧 失特殊功能来衡量细胞是否存活，保留机能者为 存活细胞，失去功能者为死亡细胞。 一、细胞存活的概念 克隆（clone)（或集落,colony） 离体培养，一个存活细胞可繁殖成一个细胞群体 细胞存活曲线（cell survival curve) 通过测量受不同辐射剂量照 射后，有增殖能力的细胞在 体内、外克隆形成能力，即 存活率的变化所绘制的剂量 －效应曲线 ? 二、细胞存活的体内、外测量 1、体外测量 单个存活细胞 细胞培养 一个克隆 SF= 某一剂量照射后形成的集落数 接种的单个细胞数×PE SF（surviving fraction)：细胞存活分数 PE(plating efficincy):系数,接种效率 X 射 线 照 射 后 的 细 胞 活 存 曲 线 用 体 外 培 养 细 胞 建 立 集落数 PE SF 90 72 90% - - 0.2 36 - 0.04 45 - 0.005 2、体内测量 先以致死剂量照射受体动物，使其无 ?脾结节计数法 内源性脾结节形成能力，将未照射的 供体动物骨髓细胞经静脉注入受体动 物，9-10天后，受体动物脾脏可形成 肉眼可见的结节，一个结节代表一个 存活细胞。 ? SF＝ Nx/Cx Nc/Cc Nx 和Cx ：代表受某一剂量照射，受 体细胞形成的结节数及注入细胞数 Nc和Cc：代表未受照射，供体细胞形 成的结节数及注入细胞数 三、细胞存活的剂量-效应曲线 常用的哺乳动物细胞存活曲线有三种 1、简单的多靶单击模型 2、修正的多靶单击模型 3、线性平方模型 ? 指数“单击”曲线 ? 细胞的存活分数为辐射剂量的简单函数 ? 见于病毒或酶的灭活，以及少数哺乳动物细胞的杀灭 ? 属于单击单靶模型。D37的倒数即为存活曲线斜率 ? D37：引起细胞（或酶分子）63％死亡（或失活）的照射 剂量 ? “多靶”或“多击”曲线 有多个靶受到一次击中或者一个靶受到多次击中 D0---平均致死剂量 Dq---准阈剂量 n D37 ? ? ? ? D0值 是细胞的平均致死剂量，剂量存活曲线的直线部 分斜率的倒数 D0愈小，斜率愈大 D0值大小代表细胞放射敏感性的高低 从存活曲线对数坐标0.1和0.037各作一条与横坐 标相平行的线与曲线相交，从这两个交点分别作 垂直线与剂量轴相交。相交点剂量之差即为D0 值，多在1～2Gy ? ? ? ? Dq值 准阈剂量（quasithreshould dose） 细胞积累亚致死性损伤的能力，与损伤修复有 关。克服肩区所需的剂量 由纵坐标1.0处作一条与横坐标的平行线，与外 推线的交点在横坐标上投影点的数值即为Dq 多在0.5～2.5Gy ? ? n值