国境口岸鼠疫检验规程.doc

ICS点击此处添加ICS号 点击此处添加中国标准文献分类号 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 XX/T XXXXX—XXXX 代替SN/T 1280-2003 国境口岸鼠疫检验规程 Inspection codes for plague at frontier port （本稿完成日期：2013.2.25） XXXX - XX - XX发布 XXXX - XX - XX实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 前言 本标准按照GB/T 1.1－2009给出的规则起草。 本标准代替SN/T 1208－2003《国境口岸鼠疫检验规程》。 本标准与SN/T 1208－2003相比，主要技术变化如下： ——修改了规范性引用文件：“GB 15991－1995”修改为“WS 279－2008”； ——修改了要求：“专用实验室”修改为“卫生部《人间传染的病原微生物名录》规定的相应等级的生物安全实验室 修改了检验程序； ——修改了结果判定； ——修改了附录Ａ、附录Ｂ、附录D，附录B修改为规范性附录。 本标准的附录A、附录B、附录C、附录D为规范性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国内蒙古出入境检验检疫局、中华人民共和国天津出入境检验检疫局和中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：王东胜、乔舜、魏怀波、田丽、孟东平、孙利。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： ——SN/T 1208－2003。国境口岸鼠疫检验规程 范围 本标准规定了国境口岸鼠疫检验的实验室生物安全规范、材料的采集、保存和运输、检验程序、结果判定。 本标准适用于国境口岸检验检疫工作中鼠疫的实验室检验。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 WS 279－2008 鼠疫诊断标准 要求鼠疫菌检验在实验室内进行。检验人员熟悉实验室管理制度自身防护制度技术操作规程等凡进入毒室操作，两人以上同时工作。及时准确做好检验的各项实验记录。 准备 设备和材料 天平； 离心机、离心管； 震荡器； 温箱； 显微镜； 解剖盘、剪刀、短镊子； 带盖白瓷缸； 接种棒、白金耳； 平皿； 灭菌小试管； 1 mL注射器； 血凝微量板、稀释棒； 定量滴头。 培养基和试剂 鼠疫菌检验 95%溶血（0.1%）赫氏琼脂平板(培养基的制备见附录C)； 龙胆紫（1:10万～1:20万）亚硫酸钠（0.025%）平板或龙胆紫溶血平板间接血凝试验（HA） 2.5% F1抗原致敏血球用细菌凝集效价为1:320的鼠疫全菌免疫血清滴定、血凝滴度应不低于1:40 000 与假结核血清交叉滴定滴度应不高于15； 符合的致敏血球为合格诊断用血球每一鼠疫季节开始前或更换致敏血球批号时应进行上述滴定1%正常兔血清盐水2.5%单宁酸血球。F1抗原液（50 μg/mL～100 μg/mL）。 血凝试验(RIHA)2.5%鼠疫抗致敏血球1%正常兔血清盐水疑似鼠疫材料的采取、保存和运输 鼠疫菌检验 镜检 涂片 取材腺、肝、脾、肺、心，用切面在洁净玻片上压印或涂成薄片；或取骨髓、脑脊液及各种渗出液、痰用接种环直接涂片用95%乙醇或乙醇、乙醚各配制的固定液固，取出自然干燥。 染色 片进行革兰氏染色美兰染色。镜检 发现革兰氏阴性两极浓染两端钝圆的短小球杆菌，符合鼠疫菌的特点注意腐败材料或陈旧材料菌本形态的变化。细菌培养鼠疫噬菌体裂解试验动物接种间接血凝试验（HA）(RIHA) 执行WS 279－2008 第E2章的规定。 结果判定鼠疫菌判定依据判定间接血凝试验的判定判定反向血凝试验的判定判定（规范性附录）鼠疫实验室生物安全规范 导言 由于鼠疫菌特别危险的性质，对鼠疫实验室有不同于一般细菌学实验室的特殊要求。鼠疫菌检验在实验室内进行。II级以上生物安全柜，即为生物安全II级实验室，可简化进入实验室的着装要求。 生物安全Ⅲ级实验室 在生物安全II级的基础上，实验室维持恒定的负压，保证进出实验室时空气流向为由外向内，保证实验室内空气流向自上而下，无横向气流和紊流，并维持必要的洁净度，即达到生物安全III级标准。　适用于特别危险，容易产生气溶胶的实验操作，并具备较强的抗御事故能力。 鼠疫实验室工作制度 进行鼠疫强毒操作时，需有两名工作人员同时进入实验室。 非实验室工作人员一律禁止进入鼠疫强毒实验区。 实验室内禁止吃东西、吸烟和喧哗。 全体工作人员经鼠疫正规培训后方可进行强毒操作，并严格按照鼠疫菌强毒操作规程和其它国家标准进行各项实验，准确记录实验结果。 工作人员要熟知实验室常规感染途径和