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种子生产与经营专业教学资源库;主要内容;一、实验目的
熟悉植物蛋白提取原理和方法，了解其意义及其应用价值。;二、实验原理
植物蛋白要尽可能提高样品蛋白的溶解度，抽提最大量的总蛋白，减少蛋白质的损失；减少对蛋白质的人为修饰；破坏蛋白与其他生物大分子的相互作用，并使蛋白质处于完全变性状态。;三、实验材料
（一）实验材料
植物新鲜叶片组织。
;三、实验材料
（二）实验试剂
1、20mL样品提取缓冲液：
2.5mL0.5mol/LTris-HCl；1.0mL1%SDS；2.0mL100%甘油；1.0mL100%β-巯基乙醇，加双蒸水定容至20mL。
2、10mL上样缓冲液：
1.25mL0.5mol/Ltis-Hcl；1.0mL100%甘油；0.5mL100%β-巯基乙醇，加双蒸水定容至10mL。
3、-20℃下预冷丙酮。;三、实验材料
（三）实验仪器
离心机、移液器、研钵、离心管等。;四、实验步骤
（1）取0.3g左右的植物叶片，加入4mL提取缓冲液和适量石英砂，色素多的可按材料鲜重的10%加入PVP。
（2）在研钵中研磨充分后转入10mL离心管中，摇匀并放在4℃条件下提取0.5h，充分溶解蛋白。
（3）4℃6000r/min离心10min，弃沉淀，上清液中加入2.5～3倍体积的预冷丙酮-20℃条件下放置10min，让蛋白充分沉淀。
;四、实验步骤
（4）4℃6000r/min离心5min，弃上清，使丙酮完全挥发后加入上样缓冲液500μl溶解沉淀，沉淀充分溶解后，转移至1.5mL离心管中。
（5）4℃10000r/min离心5min，取上清液即为所提取的蛋白溶液。
;五、注意事项
（1）在提取过程中要避免蛋白降解。
（2）操作过程中动作要快，避免污染。
（3）实验过程中要戴手套操作，避免剧烈的震荡。;谢谢观看
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