外植体的接种pptx (1)课件讲解.pptx

外植体的离体培养技术主讲人：姜放军湖南生物机电职业技术学院植物组织培养技术

任务外植体的选择与处理

任务：以小组为单位，取飘香藤顶芽或叶片，进行无菌操作，要求每瓶接种1-2个材料，接种完成后，作记号，放入培养室培养，7天后记录观察结果并完成实训报告。

四、外植体的接种

（一）外植体的接种（无菌操作）是把经过表面消毒后的植物材料切碎或分离出器官、组织、细胞，并将它们转移到无菌培养基上的全部操作过程。整个接种过程均须无菌操作。操作过程中引起的污染，主要由空气中的细菌和工作人员本身引起的。因此除接种室空气消毒外，应特别注意防止工作人员本身引起的污染。

接种注意事项1．操作人员需着经消毒的白色工作服，戴口罩。进入接种室前，工作人员的双手必须进行消毒，用肥皂和水洗涤能达到良好的效果,进行操作前再用70%的酒精擦洗双手。2．操作期间经常用75%的酒精擦拭双手和台面。特别注意防止“双重传递”的污染，例如器械被手污染后又污染培养基等。

3．在打开培养瓶、三角瓶或试管时，最大的污染危险是管口边沿沾染的微生物落入管内，解决这个问题，可在打开前用火焰烧瓶口。如果培养液接触了瓶口，则瓶口要烧到足够的热度，以杀死存在的细菌。为避免灰尘污染瓶口，可用纸包扎瓶口和塞子，以遮盖瓶子颈部和试管口，相对地减少污染机会。

4．工具用后及时消毒，避免交叉污染。5．工作人员的呼吸也是污染的主要途径。通常在平静呼吸时细菌是很少的，但是谈话或咳嗽时细菌便增多，因此操作过程应禁止不必要的谈话并戴上口罩。

6．由于空气中有灰尘，因此在操作时，仍要注意避免灰尘的落入。尽量把盖子盖好，当打开瓶子或试管时，应拿成斜角，以免灰尘落入瓶中。刀、剪、镊等用具，一般在使用前浸泡在95%酒精中，用时在火焰上消毒，待冷却后使用。每次使用前均需进行用具消毒。

外植体接种全过程酒精擦拭手外植体消毒浸泡5min器械消毒酒精灯灼烧酒精擦拭培养皿

酒精擦拭旋转灼烧取外植体接种盖好瓶塞修剪外植体

灭菌烧杯、无菌水、洗液、灭菌剂、镊子、超净台等工作前准备任务实施分六组，各组采取植物外植体进行消毒1、外植体的选取2、外植体的消毒工作实施

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