抗猪瘟血清的制备.ppt

抗猪瘟血清的制备

实训目的

掌握抗血清的制备及注意事项。

学习抗血清效价测定方法。

实验材料

猪瘟疫苗、纯种新西兰兔（2~3kg为宜）、小白鼠、注射器、离心机、琼脂粉、平皿、打孔器、磷酸盐缓冲剂。

实验步骤

1.基础免疫：猪瘟疫苗1头份于新西兰兔背部皮下多点注射，每点注射0.1ml左右。

2.10-12d后，进行第二次强化注射，剂量同前。

实验步骤

3.10-12d后，从耳缘静脉取2-3ml血，制备血清，检测抗体效价。如未达到预期效价，需再进行加强免疫，直到满意为止；当抗体效价达到预期水平时，即可放血制备抗血清。

实验步骤

4.抗血清的采集与保存：

颈动脉采血：颈动脉放血时，将兔仰卧，固定于兔台，剪去颈部的毛，切开皮肤，暴露颈动脉，插管，放血。

实验步骤

4.抗血清的采集与保存：

保存：收集的血液置于室温下1h左右，凝固后，置4℃下，过夜析出血清，4000r/min，离心10min。在无菌条件下，吸出血清，分装（0.05-0.2ml），贮于-40℃以下冰箱，或冻干后贮存于4℃冰箱保存。分装保存的抗血清应注明抗血清的名称、效价、制备日期以及包装量。

实验步骤

5.抗血清质量的评价

①物理性状检查：血清透亮、透明，呈草黄色或金黄色。

②无菌检查:采血清样进行普通肉汤、琼脂斜面、肝片肉汤，观察3-7天，应无菌生长。

实验步骤

5.抗血清质量的评价

③安全检查：取血清样0.5ml，皮下注射小白鼠，一次注射3-5只，观察7天，小白鼠应健康存活。

④抗血清的效价：血清中抗体浓度或含量。

利用双向扩散法检测抗血清的效价

双向扩散法：利用大分子抗原和抗体在琼脂板上扩散，两者在相交之处产生沉淀线，以观察和判断抗血清中是否有抗体及其浓度。

利用双向扩散法检测抗血清的效价

琼脂板的制备：100ml，pH7.2的磷酸盐缓冲液加到15g琼脂内，于水浴中加温，搅拌、使琼脂完全溶解，用移液管把琼脂放在干净的载玻片上，约3mm厚，待其冷却，完全凝固后，用打孔器打孔，中央孔内加适量抗原（容量为20ul），周围各孔内分别加入20uL1:2、1：4、1:8、1:16、1:32及不稀释的抗血清，37℃下孵育24h，观察有无沉淀产生，以判断血清的稀释度。

注意事项

1.至少免疫两只新西兰兔：每个动物对免疫反应不同，产生抗体效价有高有低。

2.在整个血清采集保存过程中应保持无菌操作。

3.过夜析出血清切勿冰冻，保存血清可-40℃冰冻贮存或4℃冻干贮存。

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