第八章--发酵染菌及其防治.pptVIP

第八章发酵染菌及其防治第三节发酵染菌后的异常现象概念：由于发酵染菌导致发酵过程中的某些物理参数、化学参数或生物参数发生于原有规律不同的改变。1、种子培养染菌的异常现象（1）菌体浓度异常菌体浓度逐渐降低（一般是感染噬菌体）菌体浓度迅速增加（大多是感染杂菌）（2）理化指标异常：温度改变pH值异常变化；（3）代谢异常碳源消耗异常氮源消耗异常2、发酵染菌的异常现象（1）菌体浓度异常菌体浓度异常下降菌体浓度异常升高菌体繁殖和代谢速率缓慢（2）pH过高或过低pH上升（感染噬菌体，导致菌体自溶，释放大量氨、氮）pH下降（感染杂菌，基质大量消耗产生酸性物质）（3）溶解氧及CO2水平异常溶解氧短时间内下降，甚至接近零，且长时间不能回升（污染耗氧微生物）耗氧量减少，溶解氧升高（污染非耗氧微生物或者噬菌体）耗糖量加快，CO2含量增加（污染杂菌）耗糖量减少，CO2含量减少（污染噬菌体）（4）泡沫过多污染噬菌体（5）代谢异常碳源、氮源消耗异常加快，产物合成速度下降（污染杂菌）碳源、氮源消耗下降，甚至不消耗，产物合成速度大大下降（污染噬菌体）。表1发酵过程的杂菌检查第四节发酵无菌状况的检测和染菌途径的分析1、环境无菌的检查尘埃粒子检测无菌平板检测2、种子及发酵液无菌状况检测酚红肉汤培养基检测（检查培养基和无菌空气是否染菌，肉汤由红变黄）平板划线显微镜观察一、发酵无菌状况检测肉汤无菌空气每月一次分过滤器肉汤无菌空气每月一次总过滤器平板划线及镜检发酵液24h发酵平板划线及镜检发酵液16h发酵平板划线及镜检发酵液8h发酵平板划线接种后发酵液0h发酵平板划线灭菌后、接种前发酵液0h发酵平板划线及镜检发酵液成熟种子种子罐种子平板划线及镜检发酵液培养中期种子罐种子平板划线接种后发酵液0h种子罐种子平板划线灭菌后，接种前0h种子罐种子平板划线及镜检成熟培养基摇瓶种子平板划线成熟斜面，抽检斜面检查方法被检物名称时间工序3、检查的工序和时间二、染菌情况及其途径的分析染菌的原因有多种，对于实际情况如何分析呢？1、单罐染菌不是系统问题，而是该罐本身的问题。如种子带菌、培养基灭菌不彻底、罐体及阀门有渗漏、分过滤器失效等。2、多罐染菌系统问题，如空气过滤系统有问题，特别是总过滤器长期没有检查，可能受潮失效；移种或补料的分配站有渗漏或灭菌不彻底3、前期染菌种子带菌、培养基及设备灭菌不彻底，4、中后期染菌补料的料液灭菌不彻底或补料管道、阀门渗漏，一般不会是种子问题第五节染菌的防治一、种子带菌及防止1、种子带菌的可能原因（1）无菌室的无菌条件不符合要求（2）种子培养基灭菌不彻底（3）移种操作不当（1）无菌室要求在无菌室中装有紫外灯，打开紫外灯，照半小时，关灯后15分钟再接种。用消毒药水如新洁而灭配成1/1000浓度擦桌子、拖地，开启超净台的通风，接种时必须在超净台上操作，超净台装有一台鼓风机，进风口有一粗过滤器，出风口有高效过滤器，保证无菌风从超净台吹出，外界有菌空气不可能进入接种区域，保证无菌条件。接种人员必须穿好无菌服，戴好口罩，手用酒精棉球擦干净。制备种子时对沙土管及摇瓶严格加以控制。沙土制备时要多次间歇灭菌注意接种时的无菌操作子瓶、母瓶的移种和培养无菌室和摇床间都要保持清洁。无菌室内要供给恒温恒湿的无菌空气，还要装紫外灯用以灭菌，或用化学药品灭菌。（2）培养基灭菌及移种操作（3）防止培养基灭菌不彻底培养基灭菌方法——高压蒸汽灭菌分批灭菌1210C，30分钟连续灭菌罐温125－1300C，30－45s蒸汽下进上出连续灭菌设备流程连消塔培养基灭菌前含有大量杂菌，灭菌时如果蒸汽压力不足，就达不到要求的温度；灭菌时产生大量泡沫或发酵罐中有污垢堆积，就会窝藏大量杂菌，造成灭菌不彻底。为什么蒸汽灭菌时会产生大量泡沫呢？培养基和水的传热系数比空气的传热系数大，如果灭菌时升温太快，培养基急剧膨胀，发酵罐内的空气排出较慢，就会产生大量泡沫，泡沫上升到发酵罐顶，泡沫中的耐热菌就不能与蒸汽直接接触，未被杀死。防止方法：缓慢开启蒸汽阀门，或加入少量消泡剂。灭菌时还会因设备安装或污垢堆积造成一些“死角”。这些死角蒸汽不能有效达到，常会窝藏耐热芽孢杆菌，所以设备安装要注意不能造成死角，发酵设备要经常清洗，铲除污垢。二、防止设备渗漏发酵设备及附件由于化学腐蚀、电化学腐蚀，物料与设备摩擦造成机械磨损以及加工制作不良等原因会导致设备及附件渗漏。设备上一旦渗漏，就会造成