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细胞传代实验报告

细胞传代培养

一.实验目的

初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程，为生物技术在医学上的

应用打下基础。

二、原理

从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生

长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察

活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与

体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗费少，比较经济，

因此成为生物学研究的重要手段。

细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为

原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散

后，从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传

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代培养的累积次数就是细胞的代数。

细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。所有离体细胞的生长都受

温度、渗透压、pH值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操

作是细胞培养成败的关键。

三、材料和试剂

1、细胞:293细胞株

2、试剂:0.25,胰酶、1640培养基

3、仪器和器材:倒置显微镜，培养箱、电动枪，培养板，吸液枪，5ml玻璃吸管、酒精

灯等

四、操作步骤

1、将长满细胞的培养板中原来的培养液吸去。

2、加入1~2ml0.25,胰酶溶液，使板底细胞都浸入溶液中。

3、马上吸走胰酶液，再次加入2ml左右的胰酶，同样马上吸去，再加入几滴胰酶放入培养箱中消化几分钟

4、用吸管将贴壁的细胞反复吹打成悬液，再按照观察的生长情况确定的传代比例传代

5.根据确定的比例来取需要的量，加入4ml左右的

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培养液

.前后左右的来回震荡使细胞分散均匀后，将培养板放入培养箱

7.收拾整理超净台

附:消化液配制方法:

称取2.5克胰酶蛋白酶，加入100ml10xPBS+纯水溶解到1L，滤器过滤除菌，4?保存，

用前可在37?下回温。

10xPBS配方:

Na2HPO4(14.2g)KH2PO4(2.32g)NaCl(80g)KCl(2.02g)

(调至PH=7.4)

五、实验结果

传代后的细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上，2天左右就在瓶内形成单层，

达到七八成满。这时需再次传代

六、讨论与反思

无菌操作中的注意事项

在无菌操作中，一定要保持工作区的无菌清洁。为此，在操作前要认真地洗手并用75,乙醇消毒。操作前20,30分钟起动超净台灭菌。培养瓶要在超净台内才能打开瓶塞，打开之前和加塞前瓶口都要在酒精灯上烧一下，打开瓶口后的操作全部都要在超净台内完

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成。操作完毕后，加上瓶塞，才能拿到超净台外。使用的吸管在从消毒的铁筒中取出后要手拿末端，将尖端在火上烧一下，戴上胶皮乳头，然后再去吸取液体。总之，在整个无菌操作过程中都应该在酒精灯的周围进行。

每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准:健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。

多做，熟能生巧

一、【实验目的】

1、了解动物细胞传代培养的基本原理。

2、掌握动物细胞传代培养的基本操作，并对Hela细胞进行传代培养。

二、【实验原理】

HeLa是HenriettaLacks的简称，HenriettaLacks是一位患有子宫颈癌的美国妇女的名字，在她死后，该细胞走被广泛散发到各研究机构，并无限次地繁殖分裂下去。

培养细胞的特性:

贴附生长:必须贴附于支持物表面才能生长。见于各种实体瘤细胞。

悬浮生长:于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于

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