细胞活性测定P.pptx

细胞活性测定生物制药技术专业教学资源库主讲老师：陈郁生物活性检测生物活性检测生物活性检测方法在国内有多种名称，如“生物活性方法”“生物活性检测法”“生物活性检测技术”或“效价测定方法”。是指使用动物整体、组织器官、细胞以及相应的活性材料作为受试体，以药物的药理毒理作用为基础，以生物统计为工具，运用特定的实验设计在一定条件下测试生物受试体所产生的特定活性反应的一类方法。通常以单位(unit)表示其活性大小。生物活性检测方法广泛应用于药品领域的活性和/或毒性评估，为药品领域的发展发挥了重要作用。我们先看一下什么是效价效价是正确理解生物活性检测方法的前提，指“产品经实验室适当测定或通过以预期方式获得充分控制的临床数据，所得到的能产生预期效应的特定能力结果”。效价会根据物质来源、使用方式等的不同而有不同的名称。(1)在不同物质方面:如生物制品领域，由病毒产生的效应常称之为“滴度”;由类毒素或毒素产生的效应则称之为“絮状单位”。(2)在不同来源方面:其可分为“绝对效价”和“相对效价”。绝对效价是指直接以临床效应确定产品活性的效价。而相对效价是指以已有参考效价为基准，在同一测量体系下通过比较获得的产品效价量值。由于生物测量系统的变异性较大，使用绝对效价往往会导致产品之间的效价难以比较。故建议使用相对效价评价产品，更利于产品间的相互比较。(3)按照使用方式的不同:如对标准物质的效价称为“指定效价”，国内也有称为标准品的“理论效价”;对生产商给出的产品效价称为“标示效价”，也指经过与标准物质比较并通过换算获得的效价值。此外，产品在具体检测中计算出的效价，也称为“效价(估)值”或“效价报告值”。我们来看一下生物活性检测方法的分类1.按生物反应直接与否分类是按照是否直接以特定生物反应强制关联进行划分，可分为直接法和间接法。直接生物活性检测方法是以引起特定效应为终点来测定药物浓度的测量方法。该法要求其生物反应必须是直观明确的;在给予药物时，引起该特定生物反应的确切剂量必须很容易地被测定并记录。间接生物活性检测方法是通过与性质相似、名义上等浓度的参考品所产生同种生物反应的程度进行对比，从而确定待测药物的效价的方法。该类方法与直接生物活性检测方法的不同是它们不直接与某一特定生物反应强制关联。《中国药典》上收载的绝大多数品种，多为间接生物活性检测方法。2.按所用生物受试体分类体内生物活性检测方法简称体内法，指利用整体动物作为受试体的一类生物活性检测方法。体内法是最常用的活性检测法，因其缺点是个体间差异大，即使在纯种动物中进行试验，重复性也比较差，且不符合3R原则，故该方法正在被越来越多的体外方法所替代。离体生物活性检测方法简称离体法，指利用人或动物的原代组织(器官)或细胞在实验室进行培养，以评价待测样品活性的技术。离体法具有与体内法相似环境和功能的优点，但它也同样受到许多因素的影响。如细胞活力等因素的干扰。虽然其有与体内法相似的缺点，但优点是可减小方法的变异和偏倚，提高结果的精密度与可靠性，操作方便快捷。体外生物活性检测方法简称体外法，是指利用细胞（系）或细胞器等对特定配体或感染物产生反应的特性，对产品进行活性检测的技术。该技术常应用于产品机制探索和产品放行检验等。3.按检测结果的数据类型分类量反应生物活性检测方法是指所收集的生物效应数据随着剂量或浓度的增加，其所得结果也呈比例变化的一类生物活性检测方法。对于生物活性的测定，一般在一定剂量范围内，反应呈近似等差级数，而剂量或浓度呈近似等比级数。在该类方法中，所测的指标必须是物质自身特性所具有的指标。质反应生物活性检测方法是指所收集的生物效应数据存在质的差别，通常检测结果为“有/无”、“死/活”、“合格/复试/不合格”的一类生物活性检测方法。4.按生物活性检测方法反应的机理分类功能型生物活性检测方法是指通过测定受试生物体或组织细胞产生的生物效应作为研究终点的方法或技术。它既包括直接法，也包括以生物效应为观测指标的间接法。结合型生物活性检测方法是指通过测定与生物受试体结合量作为活性指标的方法。感谢聆听生物制药技术专业教学资源库