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TransformerTMSite-DirectedMutagenesisKitUser
TableofContents
I.Introduction3
II.ListofComponents5
III.AdditionalMaterialsRequired6
IV.ExperimentalDesign8
V.Transformer™Site-DirectedMutagenesisProtocol14
A.DenaturationofsmidandAnnealingofPrimers
totheTemte14
B.SynthesisoftheMutantStrand14
C.PrimarySelectionbyRestrictionDigestion15
D.FirstTransformation16
E.IsolationoftheMixedsmidPoolUsingthe
Boiling-LysisMethod17
F.SelectionoftheMutantsmid18
G.FinalTransformation19
H.CharacterizationofMutantsmids20
VI.TroubleshootingGuide21
VII.References23
AppendixA:PhosphorylationofOligonucleotidePrimers24
AppendixB:AlternativeDenaturingandAnnealingProtocol24
AppendixC:CompetentBMH71-18mutSCellPreparation25
AppendixD:AssessmentofYieldandPurityof26
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