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生化分离工程色谱分离汇报人：AA2024-01-24

色谱分离技术概述色谱柱技术流动相与固定相选择色谱条件优化策略典型生化物质色谱分离实例色谱分离技术挑战与前景目录

01色谱分离技术概述

基于样品在固定相和流动相之间的分配平衡，利用不同物质在固定相上的吸附能力差异实现分离。色谱分离原理根据固定相和流动相的状态，色谱法可分为液-液色谱、液-固色谱、气-液色谱、气-固色谱等。色谱法分类色谱分离原理及分类

03多肽和核酸分离多肽和核酸具有复杂的结构和性质，可利用色谱法进行高效分离，如凝胶色谱、亲和色谱等。01蛋白质分离利用色谱法可实现蛋白质的分离纯化，如凝胶色谱、离子交换色谱等。02氨基酸分离氨基酸具有不同的极性和电荷性质，可利用色谱法进行分离，如离子交换色谱、反相色谱等。色谱法在生化分离中应用

多维色谱技术智能色谱技术微型化和集成化绿色色谱技术色谱技术发展趋过组合不同的色谱技术，实现复杂样品的高效分离和检测。利用人工智能、机器学习等技术优化色谱分离条件，提高分离效率和准确性。发展微型色谱柱和集成化色谱系统，降低分析成本和提高便携性。开发环保型色谱固定相和流动相，减少对环境的影响。

02色谱柱技术

由固体颗粒填充而成，具有较大的表面积和孔隙率，适用于分离大分子物质。内壁涂覆固定相，具有高分离效能和快速分析的特点，常用于小分子物质的分离。填充柱与毛细管柱毛细管柱填充柱

以非极性物质为固定相，极性物质为流动相，适用于分离非极性和中等极性物质。反相色谱柱正相色谱柱离子交换色谱柱以极性物质为固定相，非极性物质为流动相，适用于分离极性物质。通过离子交换作用实现物质的分离，适用于分离带电粒子。030201高效液相色谱柱

亲和色谱柱免疫亲和色谱柱利用抗原与抗体之间的特异性结合实现分离，具有高选择性和高灵敏度。受体亲和色谱柱利用受体与配体之间的特异性结合实现分离，适用于分离生物活性物质。金属螯合亲和色谱柱利用金属离子与特定配体之间的螯合作用实现分离，适用于分离含有金属离子的物质。

03流动相与固定相选择

流动相组成一般由有机溶剂和水组成，根据分离需求，可选择不同比例的有机溶剂和水，以及添加不同的离子对试剂、缓冲盐等。流动相作用在色谱分离过程中，流动相携带样品通过色谱柱，与固定相发生相互作用，实现样品的分离。流动相的性质和组成直接影响分离效果和色谱柱的寿命。流动相组成及作用

固定相类型根据分离原理和色谱柱填料的不同，固定相可分为液固色谱固定相、液液色谱固定相、化学键合固定相等。固定相特点不同类型的固定相具有不同的选择性，可实现不同类型样品的分离。例如，液固色谱固定相对极性物质有较好的保留能力，而液液色谱固定相则适用于非极性物质的分离。固定相类型及特点

相似相溶原则01根据相似相溶原理，流动相和固定相应具有相似的化学性质，以确保样品在两相之间的分配平衡。极性匹配原则02流动相和固定相的极性应相互匹配，以确保样品在色谱柱上的保留时间和分离效果。极性较大的样品应选择极性较大的流动相和固定相，反之亦然。选择性匹配原则03根据样品的性质和分离需求，选择具有合适选择性的流动相和固定相。例如，对于含有多种官能团的复杂样品，可选择具有多种作用机制的固定相，以提高分离选择性。流动相与固定相匹配原则

04色谱条件优化策略

温度过高可能导致固定相流失，降低色谱柱使用寿命；温度过低则可能使色谱峰展宽，降低分离度。不同物质在色谱柱上的保留行为受温度影响不同，因此可以通过调整温度来改变分离选择性。温度升高，色谱柱内传质阻力减小，有利于加快分离速度，提高分离效率。温度对分离效果影响

压力对分离效果影响压力升高，流动相流速加快，有利于缩短分析时间。压力过高可能导致色谱柱过载，降低分离效果；压力过低则可能使流动相在色谱柱内分布不均，影响分离效果。在一定范围内调整压力，可以优化流动相在色谱柱内的分布和传质过程，提高分离效率。

流速对分离效果影响01流速增加，色谱峰保留时间缩短，有利于提高分析速度。02流速过快可能导致色谱峰展宽、重叠，降低分离度；流速过慢则可能使分析时间延长。在一定范围内调整流速，可以平衡分析速度与分离度之间的关系，实现最佳分离效果。03

05典型生化物质色谱分离实例

利用多孔凝胶对蛋白质分子的排阻作用，按分子大小进行分离。凝胶过滤色谱法通过固定相上可交换离子与流动相中蛋白质分子所带电荷的相互作用进行分离。离子交换色谱法利用生物大分子与配基之间的可逆特异性结合进行分离。亲和色谱法蛋白质类物质色谱分离

利用核酸分子所带电荷与固定相上相反电荷基团之间的相互作用进行分离。离子交换色谱法利用核酸分子与特定配基之间的可逆特异性结合进行分离。亲和色谱法利用非极性固定相与核酸分子中的极性基团之间的相互作用进行分离。反相色谱法核酸类物质色谱分离

凝胶过滤色谱