生化分离工程3.2色谱分离法.pptxVIP

生化分离工程3.2色谱分离法汇报人：AA2024-01-25

色谱分离法概述色谱分离法基本原理色谱分离法操作技术常见类型色谱分离法介绍生化分离工程应用实例分析实验设计与数据分析方法挑战与未来发展趋势预测contents目录

01色谱分离法概述

色谱法是一种基于物质在固定相和流动相之间分配平衡原理的分离技术。定义利用物质在固定相上的吸附、分配、离子交换等作用力的差异，使各组分在流动相中的迁移速度不同，从而实现分离。原理色谱法定义与原理

分类根据固定相和流动相的状态，色谱法可分为液-液色谱、液-固色谱、气-液色谱、气-固色谱等。应用领域广泛应用于化学、化工、环境、医药、食品等领域，用于物质的分离、纯化、鉴定和定量分析。色谱法分类及应用领域

发展历史色谱法起源于20世纪初的俄国，经历了从经典液相色谱到高效液相色谱、气相色谱等的发展历程。现状随着科技的进步，色谱技术不断发展和完善，出现了超临界流体色谱、毛细管电泳色谱等新型色谱技术，同时色谱仪器也向着自动化、智能化方向发展。色谱法发展历史与现状

02色谱分离法基本原理

根据待分离物质性质及分离要求，选择适当类型固定相，如吸附剂、离子交换剂等。固定相选择流动相选择相互作用根据固定相性质及分离要求，选择适当极性、粘度、pH值等流动相条件。固定相与流动相之间通过物理或化学作用实现对待分离物质的选择性吸附或洗脱。030201固定相与流动相选择

待分离物质在固定相表面发生物理或化学吸附。吸附过程通过改变流动相条件，使被吸附物质从固定相表面解吸并进入流动相。洗脱过程在固定相与流动相之间，待分离物质按一定分配系数进行分配。分配过程色谱过程传质机制

分配系数待分离物质在固定相与流动相之间的分配平衡常数，反映物质在两相中的分配能力。保留时间待分离物质在色谱柱中停留的时间，与固定相性质、流动相条件及待分离物质性质有关。关系保留时间与分配系数之间存在一定关系，通常通过实验测定不同条件下的保留时间，计算得到分配系数，用于评价色谱分离效果及优化分离条件。保留时间与分配系数关系

03色谱分离法操作技术

样品前处理技术样品提取根据目标化合物的性质选择合适的溶剂进行提取，常用方法包括浸渍法、渗漉法、煎煮法等。样品净化去除提取液中的杂质，提高色谱分离的准确性和效率，常用方法包括液-液萃取、固相萃取、凝胶渗透色谱等。样品浓缩将提取液浓缩至适当体积，以便进行后续的色谱分离，常用方法包括蒸发浓缩、旋转蒸发、真空干燥等。

根据目标化合物的性质和分离要求选择合适的色谱柱，如硅胶柱、氧化铝柱、聚酰胺柱等。色谱柱选择将选定的色谱填料均匀装入色谱柱中，注意填料的紧密程度和均匀性，以避免色谱带扩散和拖尾现象。色谱柱装填在装填完成后进行色谱柱的调试，包括流动相的流速、洗脱剂的种类和浓度等参数的优化，以达到最佳的分离效果。色谱柱调试色谱柱装填与调试技术

123根据目标化合物的性质和分离要求选择合适的流动相组成，包括有机溶剂、水、缓冲液等。流动相组成通过调整流动相的pH值、离子强度、添加剂等参数，优化色谱分离的选择性和分离度。流动相优化在某些复杂样品的分离中，可采用梯度洗脱技术，即在不同时间段内改变流动相的组成或浓度，以提高分离效果和分辨率。梯度洗脱流动相选择与优化技术

04常见类型色谱分离法介绍

利用吸附剂对不同物质吸附能力的差异进行分离。原理根据吸附剂和洗脱剂的性质可分为正相吸附色谱和反相吸附色谱。分类常用于分离极性较大的物质，如氨基酸、糖类等。应用吸附色谱法

03应用常用于分离中等极性和非极性物质，如脂肪、醇类等。01原理利用固定相和流动相之间对不同物质分配系数的差异进行分离。02分类根据固定相和流动相的性质可分为正相分配色谱和反相分配色谱。分配色谱法

原理利用离子交换剂与溶液中的离子进行交换，根据离子交换剂和离子之间亲和力的差异进行分离。分类根据离子交换剂的电荷性质可分为阳离子交换色谱和阴离子交换色谱。应用常用于分离带电物质，如氨基酸、蛋白质等。离子交换色谱法

利用凝胶的孔径大小对不同分子量的物质进行筛分，达到分离的目的。原理根据凝胶的性质可分为凝胶渗透色谱和凝胶排阻色谱。分类常用于分离大分子物质，如蛋白质、多糖等。应用凝胶过滤色谱法

05生化分离工程应用实例分析

凝胶过滤色谱法通过离子交换树脂与蛋白质之间的电荷相互作用进行分离，适用于不同电荷性质和电荷数量的蛋白质。离子交换色谱法亲和色谱法利用生物特异性相互作用原理，将目标蛋白质与特定的配体结合，实现高选择性的分离纯化。利用凝胶过滤色谱柱，根据蛋白质分子大小进行分离纯化，适用于分子量差异较大的蛋白质体系。蛋白质纯化过程实例分析

疏水作用色谱法利用多肽类药物与疏水固定相之间的疏水作用进行分离，适用于具有不同疏水性质的多肽类药物。分子排阻色谱法根据多肽类药物的分子大小和形状进行分