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实验七中药化学成份的预试验

中药中所含的化学成份较为复杂，在提取分离某种中药成份之前，一般可先进行简单的预试验，初步了解其中可能含有哪些类型的成份，以便对今后的提取分离工作提供一定的参考。预试验方法一般可分为两大类：一类是单项预试验，即根据需要重点检查某类成份，例如寻找含生物碱成份，仅需进行生物碱的定性反应，以检查生物碱的存在与否。另一类是系统预试法，即选用简单的定性方法对中药中各类成份进行较为全面的试验。

一、目的要求

1.学习中药化学成份的预试验方法及原理。

2.掌握中药预试验的程序及结果的判断。

二、实验原理

系统预试和单项预试的基本原理基本相似，首先制备供试液，然后进行各类成份的检识。制备供试液主要是利用各类化学成份在不同溶剂中的溶解度不同分成数个部份，如水溶性、醇溶性及石油醚溶性部份。有时还可结合化合物的酸碱性不同，采用酸或碱处理，使其再细分为含酸性、含碱性及含中性的化合物部份。如欲进一步了解预试的结果，也可根据化合物极性大小和分子分配子数不同采用吸附溥层层析或纸层析进行观察。

制成供试液后就可分别进行各类成份的检识，根据检出结果确定药材中含有哪些类型的化学成份。一般预试的结果只能参考，因为预试所采用的检出反应往往不是专属性很高的反应，或是各类成份之间存在干扰，使结果不明显或不正确。因此，要学会根据检识反应的检识范围及供试液的制备方法和层析结果诸因素综合考虑后再作一个恰当的结论。

三、实验内容

(一)实验样品制取方法

1.水浸液

取中药粉末4g,加40ml蒸馏水浸泡过夜，滤取3ml滤液供检查氨基酸、多肽和蛋白质，其余部份放在60℃水浴加热约10min,过滤，滤液供糖、多糖、有机酸、皂苷、苷类、酚类、鞣质等项的预试。

2.乙醇提取液

取中药粉末约5g,加60ml95%乙醇，于水浴中加热回流20min,过滤。其中30ml滤液供黄酮类化合物、蒽醌、鞣质、苷类、有机酸、香豆素、萜类、内酯、甾体等项的预试，其余滤液浓缩至1ml,供圆底滤纸层析时点样用。

如中药中的叶绿素较多，应先除去。可将药材用95%乙醇加热回流，提取液加水使其含醇量为70%,再倾入分液漏斗中，用等体积的石油醚提取两次，以除去叶绿素，分出下层70%乙醇提取液，减压浓缩至糖浆状，冷却过滤，再做上述试验。

3.酸性醇提取液

取中药粉末2g,加0.5%盐酸的乙醇溶液10ml,水浴上回流10min,过滤，

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滤液供生物碱检查用。

(二)试管及滤纸片预试法

1.检查生物碱

取酸性醇提取液，先用稀NH?OH调至中性，水浴蒸干。再加5%H?SO?4ml溶解残渣，过滤，滤液供以下试验用。

(1)碘化汞钾试剂(Mayer):取滤液1ml,加入试剂1~2滴，如有浅黄色或白色沉淀，可能有生物碱。

(2)碘化钠钾试剂(Dragendorff试剂):取滤液lml,加入试剂1~2滴，如有红色沉淀产生，可能有生物碱存在。

(3)硅钨酸试剂：取滤液1ml,加入试剂1~2滴，如有浅黄色或灰白色沉淀可能含有生物碱。

2.检查氨基酸、多肽和蛋白质

(1)双缩脲试验(Biuret反应):取1%硫酸铜溶液与10%氢氧化钠溶液各lml混合。取1ml冷水浸液，加入上述试剂，摇动后如显紫红色，表示含多肽或蛋白质。

(2)茚三酮试剂(Ninhydrin试剂):取冷水浸液lml,加入0.2%茚三酮乙醇溶液2~3滴，摇匀，在沸水浴中加热5min,冷却后，如显蓝色或蓝紫色，表明含有氨基酸、多肽或蛋白质。

3.检查有机酸

(1)用PH试纸检查：将热水提取液和乙醇提取液分别用PH试纸检查，如呈酸性，则可能含有游离酸或酚性化合物。

(2)溴酚蓝试剂：点乙醇提取液于滤纸片上，喷洒0.1%溴酚蓝试剂，如在蓝色背景上显黄色斑点，表明可能含有机酸(如不明显，可再喷洒氨水，然后暴露在盐酸气体中，背景逐渐由蓝色变为黄色，而有机酸斑点为蓝色)。

4.检查酚类化合物和鞣质

(1)1%三氯化铁试剂：取乙醇提取液lml,提取液如为酸性，即可直接进行检查，如为酸性，可加乙酸酸化后，再加三氯化铁试剂1~2滴，如呈蓝墨绿色或蓝紫色，证明可能含有酚类或鞣质。

(2)香草醛-盐酸试剂：将乙醇提取液点在滤纸片上，干燥后喷洒香草醛-盐酸试剂，如呈不同程度的红色，表明具有间苯二酚结构的化合物。

(3)三氯化铁-铁氰化钾试剂：将乙醇提取液点在滤纸片上，喷洒三氯化铁-铁氰化钾试剂，如呈蓝色斑点，证明可能含有鞣质、酚类或还原性化合物。为了进一步确证是一般酚类化合物还是鞣质，可利用鞣质与生物碱或明胶产

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