胶体金试纸条的制备(共36张精品课件).pptxVIP

胶体金试纸条的制备;目录;;胶体金免疫层析试纸的检测模式

主要表现在控制样品的流速，促进虹吸作用以及使试剂跨过膜而不仅仅移到膜上。

去除样品中杂质颗粒；

小分子物质检测

是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。

减缓样品渗透速度，有利于样品在结合垫上均匀分布；

双电层结构保证了胶体金的稳定性，使金颗粒始终以悬浮状态存在。

疫病抗原检测

移动过程中被分析物与固定在膜上某一区域的受体(抗原或者抗体)结合而被固相化，无关物质则越过该区域而被分离，然后通过标记物显色来判定试验结果，以胶体金为标记物的实验称为胶体金免疫层析试验。

当获得深红颜色的溶液时停止加热

超速离心法、凝胶过滤法

不干胶塑料衬底，片材的质量很大程度上影响了产品的货架期。

提供高吸收率、高容量以及相对稳定吸收率的吸收纸；

因此金免疫测定一般只能用于定性试验。

1974------实现间接免疫金染色法

玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸、无纺布等多种材质，多种规格，批间稳定。;胶体金技术的种类及优点;胶体金免疫层析（GoldImmune–ChromatographicAssay,GICA）技术是结合了胶体金技术和免疫层析技术发展而来的，其本质为一种固相反应的ELISA,并用胶体金来代替底物显色。

1％H2AuCl4加入200ml的锥形瓶中，并将其置于搅拌电热炉上，加入一个磁力条并将溶液加热至沸腾。

-保持金标结合物颗粒的稳定性；

试剂稳定，适用于单份测定；

不需仪器设备，操作人员不需特殊训练；

样品垫可使用化学物质进行浸渍处理，从而减少样本差异，提高试验的灵敏度。

1939-----雏形

-反应在NC膜上显色，读检测结果

Kang等以同样方式建立了猪轮状病毒胶体金抗原检测方法，并用于腹泻仔猪轮状病毒的鉴别诊断。

超速离心法、凝胶过滤法

不干胶塑料衬底，片材的质量很大程度上影响了产品的货架期。

疫病抗体检测

超速离心法、凝胶过滤法;免疫胶体金技术的特点;最近由于原料的精选和制作工艺的改进，已能制备出可用于定量测定的GICA试剂。Roche公司生产的用于急性心肌梗死诊断的肌钙蛋白和肌红蛋白的GICA试剂和匹配的简便??读器CardiacReader，其精密度和准确性均符合定量测定要求。;胶体金的合成;胶体金合成;胶体金粒径（nm）;注意事项

（1）氯金酸易潮解，应干燥、避光保存。

（2）氯金酸对金属有强烈的腐蚀性，因此在配制氯金酸水溶液时，不应使用金属药匙称量氯金酸。

（3）用于制备胶体金的蒸馏水应是双蒸馏水或三蒸馏水，或者是高质量的去离子水。

（4）是以制备胶体金的玻璃容器必须是绝对清洁的，用前应先经酸洗并用蒸馏水冲净。最好是经硅化处理的，硅化方法可用5％二氯甲硅烷的氯仿溶液浸泡数分钟，用蒸馏水冲净后干燥备用。;胶体金的质量鉴定;双电层结构保证了胶体金的稳定性，使金颗粒始终以悬浮状态存在。

胶体金溶液通常由呈单一分散状态的金颗粒组成，金颗粒直径在1-100nm之间，而稳定的金溶液则要求金颗粒维持在某一固定直径不变。;金标样本程序;胶体金调整正确的pH值;;最小蛋白用量的确定;（2）目测法：以目测法确定胶体金与待标记蛋白质用量比例，将标记的蛋白质逐级稀释后（由5μg～45μg另设对照管），各取等体积顺序加入一系列装有1ml胶体金的试管中，5min后，在上述各管内分别加入0.1ml10%氯化钠，依表顺序进行。;发现1、2号管出现黑色沉淀且红色全部褪去，3号管虽然能保持红色，但是管底也出现了一定量的黑色沉淀，而4、5号管颜色无变化与对照颜色一致，最低蛋白量即为4号管的蛋白量。;最终结合（McAb）;纯化;胶体金免疫层析法试剂的组成;样品垫(Samplepad)：

玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸、无纺布等多种材质，多种规格，批间稳定。

样品垫的作用：

减缓样品渗透速度，有利于样品在结合垫上均匀分布；

去除样品中杂质颗粒；

调节样品液pH值或粘度等。;结合垫(Conjugatepad)：

玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸、无纺布等多种材质，多种规格，批间稳定。

结合垫的作用主要为：

-吸附一定量的金标结合物颗粒；

-吸附并持续不断的将样品转移到NC膜上；

-保持金标结合物颗粒的稳定性；

-保证金标结合物颗粒定量完全释放等。

;硝酸纤维素膜(Nitrocellulose)：

一般使用Millipore，MDI，SS，whatman等国外公司的硝酸纤维素膜。

NC膜的作用：

???-在检测线和对照线条带区域固定抗体；

-样品在NC膜上流动