菌株筛选方法.docx

第二章餐厨垃圾堆肥产酶菌株筛选

2材料与方法

2.1材料

2.1.1实验材料

1） 筛选材料：HM菌剂（河南恒隆态生物工程股份有限公司）；EM菌剂（江西天意集团）；金宝贝菌剂（北京华夏康源科技有限公司）；群林发酵剂（广西北海群林生物工程有限公司）。

2） 发酵材料：餐厨垃圾（购自贵州大学南校区学生食堂）；稻草（购自铜仁市，晒十后粉碎至5mm左右）。

2.1.2主要药品及试剂

2.1.3实验仪器

电子分析天平（EL-2005）

高速台式离心机（TGL-161）

西特传感技术有限公司

Thermo公司

冷冻离心机（2-16k）

德国eppendorf公司

标准型净化工作台

上海锦星科学仪器有限公司

低温冰箱（BCD-108E）

风华电器厂

超低温冰箱（Forma-6CULT）

调温调湿箱（WS/08-01）

Thermo公司

重庆试验设备厂

干燥箱（101-2）

上海实验仪器总厂

自动三重水蒸馏器（SZ-97）

高压灭菌锅（GMSX-280）

上海亚荣生化仪器厂

英国阿斯太欧（Astell）公司

循环水浴锅（RET7）

Thermo公司

电热恒温培养箱（DH3600）

天津泰斯特仪器有限公司

上海苏坤实业有限公司上海标本模型厂上海亚荣生化仪器厂昆明金瑞克电子衡器有限公司天津市新华热工仪表有限公司河北铁狮磨浆机械有限公司恒温摇床（SKY-2102C）高速组织捣碎机（DS-1）磁力双向搅拌器（90-1

上海苏坤实业有限公司

上海标本模型厂

上海亚荣生化仪器厂

昆明金瑞克电子衡器有限公司天津市新华热工仪表有限公司河北铁狮磨浆机械有限公司

ACS交直流两用电子计价秤双金属温度计（WSS-411）秸秆揉丝饲料粉碎多用机

（9R-30）

紫外分光光度计

2.1.6培养基

1） 初筛培养基

（1） 细菌培养基（％）:牛肉膏0.3；蛋白胨1.0；氯化钠0.5；琼脂粉2.0；pH7.2

（2）霉菌培养基（%）：磷酸二氢钾0.1；七水硫酸镁0.05；蛋白胨0.5；葡萄糖

1.0；琼脂粉2.0；孟加拉红0.03；pH自然；链霉素30pg/mL

（3） 乳酸菌培养基（%）：蛋白胨1；牛肉膏1；酵母膏0.5；柠檬酸二铵0.2；葡萄糖2.0；吐温800.1；乙酸钠0.5；三水磷酸氢二钾0.2；七水硫酸镁0.058；七水硫酸锰0.025；琼脂粉2.0；pH6.2

（4）放线菌培养基（%）：可溶性淀粉2；氯化钠0.05；硝酸钾0.1；磷酸氢二钾0.05；七水硫酸镁0.05；七水硫酸亚铁0.001；重铭酸钾0.015；琼脂粉2.0；pH7.4；青霉素3pg/ml

2） 复筛培养基

（1） 产淀粉酶筛选培养基（%）：可溶性淀粉0.2；蛋白胨1.0；酵母膏0.5；磷酸氢二钾0.3；七水硫酸亚铁微量；七水硫酸镁微量；琼脂粉2.0；pH7.0

【陈秋红，孙梅，施大林，等.益生菌酪酸菌CB-7发酵培养基及培养条件的研究.科学试验与研究[J].2009,4:7-10,21】

（2） 产脂肪酶筛选培养基（%）：硫酸铵0.1；磷酸氢二钾0.1；氯化钾0.05；七水硫酸镁0.01；橄榄油1.0；聚乙烯醇0.1；琼脂粉2.0；pH8.5

【刘敏，曹志军,焦艳芬，等.UHT乳中产耐高温脂肪酶嗜冷菌的研究[J].内蒙古农业大学学报.2008,29（1）:230-233】

（3） 产纤维素酶筛选培养基（％）:七水硫酸镁0.01；羧甲基纤维素钠1.5；氯化钙0.01；磷酸二氢钾0.05；硫酸铵0.2；磷酸氢二钾0.2；pH自然

【刘胜贵，严明，邹娟，等.纤维素降解真菌的筛选及其产酶条件[J].中国农学通报,2011,27（7）:102-106】

3） 产酶发酵液

（1） 产淀粉酶发酵液（％）[1：可溶性淀粉0.5；蛋白胨0.5；酵母膏0.5；氯化钠0.1；七水硫酸亚铁微量；七水硫酸镁微量；pH7.0（48h培养）

【陈秋红,孙梅,施大林，等?益生菌酪酸菌CB-7发酵培养基及培养条件的研究.科学试验与研究[J].2009,4:7-10,21】

（2） 产脂肪酶发酵液（%）：蛋白胨2.0；葡萄糖0.58；橄榄油乳化液4；硫酸铵0.1；七水硫酸镁0.05；磷酸氢二钾0.1；pH自然（72h培养）

【胡朝阳，韦晗宁,李春苑，等.产脂肪酶菌株的筛选及酶学特性研究[J].广西农业生物科学,2006,25（3）:261-268】

（3） 产纤维素酶发酵液：A液：葡萄糖0.4g；七水硫酸镁0.25g；CMC-Na0.5g；水89mL;B液：磷酸氢二钠6.0g；氯化钠0.5g；磷酸二氢钾3.0g；氯化铵1.0g；水100mL;C液：氯化钙0.11g；水100mL

灭菌后10mLB液+1mLC液+89mLA