生化实验设计-第一组课件.pptx

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13生物科学制作者:杨金标赵訸甲陈姗姗黄芳黄温馨刘亚楠实验结果(第一 组)

实验九 糖原的提取及鉴定的实验结果

注意事项实验用小动物在实验前必须饱食,因为在空腹时肝糖原易分解而是其含量减少。肝脏离体后,肝糖原会迅速分解,所以再杀死动物后,所得肝脏必须迅速用三氯醋酸溶液处理。

一、实验目的了解并掌握唾液淀粉酶活力的测定方法二、实验原理唾液淀粉酶能催化水解淀粉,生成分子较小的糊精和麦芽糖。本实验利用碘的呈色反应来测定唾液淀粉酶水解淀粉作用的速度,从而测定唾液淀粉酶活力的大小。

三、实验仪器和试剂1.仪器(1)多孔白瓷板 (2)50mL三角瓶(3)恒温水浴锅(6)100mL容量瓶(4)烧杯(7)漏斗(5)500mL容量瓶(8)吸管

2.试剂(1)原碘液:称取碘11g、碘化钾22g,加少量蒸馏水完全溶解后,定容至500mL,于棕色瓶中保存。(2)稀碘液:吸取原碘液2mL,加碘化钾20g,用蒸馏水溶解,定容至500mL,于棕色瓶保存。(3)标准“终点色”溶液①准确称取氯化钴40.2439g、重铬酸钾0.4878g,加蒸馏水溶解并定容至500mL。②准确称取铬黑T40mg,加蒸馏水溶解并定容至100mL。取①液80mL与②液10mL混合,即为终点色。冰箱保存。

四、操作步骤(1)将“标准色”溶液滴于白瓷板的左上角空穴内,作为比较终点色的标准。(2)在50mL的三角瓶中,加入2%可溶性淀粉溶液20mL,加缓冲液5mL在37℃水浴中平衡约10min,加入0.5mL稀释唾液,立即记录时间,充分摇匀。定时用滴管取出反应液约0.25mL,滴于预先充满此稀碘液(约0.75mL)的调色板空穴内,当空穴颜色由紫色变为棕红色,与标准色相同时,即为反应终点,记录时间T(min)。

五、计算1mL唾液淀粉酶于37℃、pH 6.8的条件下,1h液化可溶性淀粉的克数,称为唾液淀粉酶的活力单位。酶活力单位=(60/T×20×2%×n)/0.5n——唾液淀粉酶稀释倍数60——1h(60min)0.5——吸取待测唾液淀粉酶的量(mL)2%——淀粉浓度20——2%可溶性淀粉溶液的量(mL)T——反应时间(min)

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