液相注意事项.docx

岛津液相色谱仪注意事项 流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其 他物质（使用0.45um或更细的膜过滤）。 流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。 不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。 使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去含5%有机溶剂的去离子水冲洗 管路及柱子一小时，然后用甲醇（或甲醇水溶液）冲洗40分钟以上，以充分 洗去离子。对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以 上。 长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保 存柱子，而应该用有机相（如甲醇等），因为纯水易长霉。 每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂去掉盐清洗进样器。 C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。 堵塞导致压力太大，按预柱―混合器中的过滤器―管路过滤器-单向阀 检查，并清洗。清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用 超声波清洗；③用10%稀硝酸清洗。 气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气 泡。 要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。 更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边清洗，然后插入 新的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。 高效液相色谱常见故障的断定及解决 流动相用前过滤，不在于过滤多少遍，主要是看里面还有没有肉眼可见 的小颗粒，常规做法，两手托瓶，将瓶朝一个方向旋转，在瓶底没有可见 颗粒的前提下，看瓶底，若有东西向下沉，表示里面有脏东西，需重新过 滤，否则就是流动相已过滤好。 可能的原因及解决方法 （一）保留时间变化 柱温变化柱恒温，必要时需配置恒温箱 等度与梯度间未能充分平衡 至少用10倍柱体积的流动相平衡柱 3.缓冲液容量不够 用25mmol/L的缓冲液 柱污染每天冲洗柱 柱内条件变化稳定进样条件，调节流动相 柱快达到寿命采用保护柱 （二）保留时间缩短 1.流速增加检查泵 1.流速增加检查泵，重新设定流速 1=1 样品超载降低样品量 键合相流失流动相PH值保持在3~7.5,检查柱的方向 流动相组成变化一次不要配太多流动相，以免流动相放时间太久出现流 动相蒸发或沉淀。 温度增加 柱恒温 （三）保留时间延长 1?流速下降管路泄漏，更换泵密封圈,排除泵内气泡 硅胶柱上活性点变化用流动相改性剂，如加三乙胺，或采用碱至钝化柱 3.键合相流失 3.键合相流失 同前（二）3 流动相组成变化同前（二）4 温度降低同前（二）5 （四）出现肩峰或分裂峰 样品体积过大用流动相配样，总的样品体积小于第一峰的15% 样品溶剂过强采用较弱的样品溶剂 柱塌陷或形成短路通道更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件 柱内烧结不锈钢失效 更换烧结不锈钢,加在线过滤器，过滤样品 进样器损坏更换进样器转子 （五）鬼峰 进样阀残余峰每次用后用强溶剂清洗阀，改进阀和样品的清洗 2?样品中未知物 处理样品 柱未平衡重新平衡柱,用流动相作样品溶剂（尤其是离子对色谱） 4.三氟乙酸（TFA）氧化（肽谱）每天新配，用抗氧化剂 5.水污染（反相）通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水 （六）基线噪声 气泡（尖锐峰）流动相脱气，加柱后背压 污染（随机噪声）清洗柱，净化样品，用HPLC级试剂 检测器灯连续噪声更换氘灯或检测池脏 电干扰（偶然噪声）采用稳压电源，检查干扰的来源（如水浴等） 检测器中有气泡流动相脱气，加柱后背压 （七）峰拖尾 匹 1=1柱超载降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相 匹 1=1 峰干扰 清洁样品，调整流动相 匹1=1硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相 匹1=1 PH值，钝化样品 同前（四）4同前（四）4 同前（四）3 5.同前（四）3 死体积或柱外体积过大连接点降至最低，对所有连接点作合适调整，尽可 能采用细内径的连接管 柱效下降用较低腐蚀条件，更换柱,采用保护柱 （八）峰展宽 进样体积过大同（四）1 在进样阀中造成峰扩展 进样前后排出气泡以降低扩散 数据系统采样速率太慢 设定速率应是每峰大于10点 检测器时间常数过大 设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10% 5.流动相粘度过高增加柱温 5.流动相粘度过高增加柱温,采用低粘度流动相 1=1 检测池体积过大用小体积池，卸下热交换器 1=保留时间过长等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱 1= 柱外体积过大将连接管径和连接管长度降至最小 样品过载进小浓度小体积样品 液相色谱柱使用经验谈 色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后 评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动 相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱 柱出厂报告中的条件进行（出厂