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薄层色谱法(TLC) 1 ( 一) 平面色谱法的概念 平面色谱法是将固定相涂布于平面载板上， 流动相借毛细管作用流经固定相，使被分离后 的物质保留在固定相上的一种色谱方法。 薄层色谱法是将被分离物质点在将固定相均 匀涂布于玻璃板、铝箔或塑料片上形成的薄层上 而进行分离的。 一、薄层色谱法的概述 薄层色谱 平面色谱 纸色谱 2 薄层色谱 高效液相色谱 色谱系统 开放式 闭路 展开方式 展开 洗脱 流速控制 吸附剂的毛细管作用 由泵调节 平衡时间 短 不定 分析样品 可同时分析多个样品 每次一个样品 样品量 高 低 板高 ( μm) 30 2~5 有效板数 600 ~5000 检测方式 静态 动态 溶剂用量 少 多 溶剂更换 易 难 固定相 一次弃去 反复使用 3 (二) 薄层色谱与高效液相色谱的比较 二、薄层色谱法的技术参数 薄层色谱法的技术参数包括分配系数与容量因 子，理论塔板数与塔板高度，分离度，保留值等。 薄层色谱保留值表示方式有：比移值(Rf) 比移值是溶质移动距离与流动相移动距 离之比，是薄层色谱的基本定性参数。 4 当Rf=0时，表示组分留在 原点未被展开；当Rf=1时，表 示组分随展开剂至前沿，即组 分不被固定相吸附，所以Rf值 只能在0~1之间。通常Rf值在 0.2~0.8之间较适宜。 高比移值 (hRf=100×Rf) 5 三、薄层色谱法的基本操作 薄层板的准备 定性与定量 样品处理 定位 展开 6 ( 一) 薄层板 制备薄层板的载板包括有：玻璃板、塑 为制了薄使层薄板 定附相着有在在：： 上化便铝 素素，，、需聚要酰时胺 凝定胶相等中中，， 色的谱粘法 需在固定相中加入某些添加剂。 固固；； 为相 %殊以 离离或工检作出都 ，， 有。时也 7 料片和铝箔。 1、固定相 普通硅胶和改性硅胶两种类型。 ①普通硅胶 硅胶为多孔性无定形粉末，表面有硅醇基成弱 酸性 (pH=4.5)，通过硅原子上的-OH基与极性化合 物或不饱和化合物形成氢键而表现其吸附性能。有 效的硅醇基数目越多，其吸附能力越强。 ( 1)硅胶 8 ② 改性硅胶 改性硅胶是借化学反应的方法，将有机分子以共 价键连接在硅胶的硅醇基上，因此称为化学键合固定 键合有机分子中含有某种极性基团，和 普通硅胶比，吸附活性降低。 硅胶的分离效率的高低与其粒度、孔径及表面 键合相表面都是极性很小的烃基，最 常用的就是十八烷基键合硅胶。 相。按键合有机硅烷的官能团分为极性键合相及非极 积等几何结构有关。 性键合相。 9 (2) 氧化铝 用氧化铝可分离萜类、生物碱类、脂肪类 及芳香族化合物，因制备方法和处理方法的差 别，氧化铝有弱碱性 (pH=9~10)、酸性 (pH=4~5)及中性(pH=7~7.5)之分，因此其使用 范围也有所不同。 它在薄层色谱法中的应用范围仅次于硅胶。 10 ①纤维素 按其用途不同分为普通纤维素 (天然纤维 素、高纯度纤维素、微晶纤维素) 、乙酰化纤 维素和离子交换纤维素。 ②另外还包括聚酰胺，葡聚糖凝胶 (亲水性葡聚 糖凝胶、亲脂性葡聚糖凝胶和葡聚糖凝胶离子 交换剂) 和硅藻土等固定相。 11 (3) 其他固定相 2、粘合剂及添加剂 (1) 粘合剂 理想的粘合剂要求亲水性好、粘结力强 且具有化学惰性。 常用粘合剂有：煅石膏(CaSO4) 、羧甲基 高聚物。 纤维素钠(CMC-Na) 、淀粉；预制板的粘合剂 包括有聚乙烯醇、聚丙烯醇或聚丙烯酰胺等 12 为了特殊需要可在制备薄层时加入某 些添加剂制备成具有特殊性能的薄层。包 括有荧光指示剂，酸、碱或缓冲液，硝酸 银溶液和其他。 带有荧光指示剂的薄层在紫外灯下整个薄 层呈现荧光，被分离化合物的斑点处的荧光被 猝灭而呈暗色。 (2) 添加剂 13 符号 含义 G 以石膏作粘合剂 H 无外加粘合剂 R 特别纯化的 P 制备用 W 水可湿性的 F 254,365 荧光指示剂激发波长 F254s 抗酸性荧光指示剂 40,60,…. 平均孔径 吸附剂及预制板包装上部分符号及含义 14 3、薄层板的制备方法 薄层板包括有预制板和手工制板两种。 (1) 预制板 预制板使用方便，涂布均匀，薄层光滑及有很 好的牢度，预制板有用玻璃板，塑料片或铝箔作为 载板，使薄层附着在上面，塑料片或铝箔的预制板 还有裁剪方便的优点。常用于薄层定量。 15 含粘合剂的硬板两种。 手工制板所用的玻璃板一般 为5cm×20cm，10cm×20cm或 20cm×2