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一种过氧化物及角质酶联合处理聚乙烯的方法 1.本发明涉及一种过氧化物及角质酶联合处理聚乙烯的方法，属于环境科学、 材料学及酶工程领域。 背景技术： 2.聚乙烯是由碳碳单键做为骨架连接而成的高分子聚合物，是最简单的聚烯烃 类高聚物，在日常生活被广泛使用。然而，伴随的后果是聚烯烃垃圾的广泛分 布以及其对生态系统和生物健康带来的巨大压力。因此，聚乙烯垃圾的降解一 直是困扰全球的问题。相较于物理或化学方法，生物法在降解聚烯烃方面展现 出耗能低、环保的优势。 3.由于碳碳单键较高的键能(330 – 370kj mol-1 )，生物酶催化聚乙烯降解需要先进行活化。目前，氧化处理手段主要包括 uv、强酸强碱或无机氧化剂的处理，生成的官能团主要为羟基、羰基、碳碳双 键等。在上述预处理的基础上，目前已报到了部分氧化还原酶能够降解聚乙 烯。如漆酶(lac)能够降解 uv 氧化聚乙烯，重均分子量损失约 20％；木质素过 氧化物酶(lip)及锰过氧化物酶(mnp)能够在黑液介质下降解 k2cr2o7 氧化的聚 乙烯；乳胶清除蛋白(lcp)催化 uv 氧化的聚乙烯后重均分子量损失约 42.02％。上述预处理方式虽能有效提高生物酶的降解作用，但是目前并未有研 究明确这些酶的利用含氧基团降解聚乙烯的机制。 技术实现要素： 4.针对目前存在的问题，本发明将一种过氧化物及角质酶联合处理聚乙烯的方 法，所述方法先使用间氯过氧苯甲酸(mcpba)催化 baeyer-villiger 反应向聚乙 烯的主链碳碳单键上添加酯键，再使用 thermobifida fusca 来源的角质酶催化 水解反应降解所述酯键，从而达到降解聚乙烯的目的。 5.在一种实施方式中，所述间氯过氧苯甲酸与聚乙烯(ldpe)的质量比为(1～ 5)：1。 6.在一种实施方式中，所述 thermobifida fusca 来源的角质酶具有 seq id no.1 所示的氨基酸序列。 7.在一种实施方式中，所述角质酶的催化时间≥1 天，5 天或 7 天。 8.在一种实施方式中，所述方法包括如下步骤： 9.(1)将 ldpe 溶解于 1,3,5-三氯苯-二氯乙烷混合溶液，80～120℃搅拌溶解 10～14h；添加 mcpba 并在 80～120℃催化 6～10h；加入甲醇沉淀 ldpe 并过 滤，再用甲醇洗涤 3-4 次去除溶剂，烘至恒重，获得含酯键的氧化聚乙烯； 10.(2)将步骤(2)制备的含酯键的氧化聚乙烯加入至角质酶酶液中，于 55～ 65℃反应至少 1 天。 11.在一种实施方式中，所述 1,3,5-三氯苯-二氯乙烷混合溶液是以等体积比将 1,3,5-三氯苯和二氯乙烷混合制成。 12.在一种实施方式中，所述 ldpe 以 1:(10～20)的比例溶解于 1,3,5-三氯苯- 二氯乙烷混合溶液。 gmh h(s)ht2 与 tskgel h hfrc 串联色谱柱及 tsk guardcolumn h(s)ht2(21489)保护柱，检测温度 145℃，进样量 300μl，洗脱溶液 1,2,4-二 氯苯，洗脱时间 50min，洗脱流速 1.0ml/min。 27.酶活的检测方法： 28.tris-hcl 缓冲液(10mm ph 7.0)：准确称取 tris 1.210g、nacl 0.584g、加 入约 800ml 去离子水，充分搅拌溶解，用 hcl 调节 ph 至 8.0，定容至 1000ml。 29.底物(50mmol/l 的对硝基苯丁酸酯溶液)：准确称取 0.1046g 对硝基苯丁酸 酯，用乙腈定容至 10ml，-20℃保存。 30.对硝基苯酚标准曲线的制作：称取 13.9mg 对硝基苯酚，用 10mm ph 7.0tris-hcl 缓冲液定容至 1000ml，配制成 100μmol/l 的对硝基苯酚母液，再 用 10mm ph 7.0 的 tris-hcl 缓冲液稀释至 0、20、40、60、80、100μmol/l。 用 0.5cm 玻璃比色皿在分光光度计上测定波长为 405nm 时的吸光值，以对硝基 苯酚浓度 c 为横坐标，吸光值 a 为纵坐标，绘制标准曲线 a＝a × c b。 31.用 5ml 的移液管准确移取 1.5ml tris-hcl 缓冲液(37℃提前温育 10min)至 0.5cm 玻璃比色皿中，在吸收波长 405nm 处调零。取 1.44ml tris-hcl 缓冲液 至 0.5cm 石英比色皿中，取 30μl 待测稀释酶液加入上述石英比色皿中，取 30μl 底物溶液，加入上述石英比色皿中，摇匀后立即放入可见分光光度计 中，在吸收波长 405nm 处测 a 值。每隔 5 秒钟记录一次 a 值，反应时间为 1 分 钟。 32.计算： [0033][0034] 式中：k：