实验2-培养基的制备.docx

实验二微生物培养基的制备 一、目的要求 1、巩固培养基的配制原理及培养基的理论知识 2、掌握培养基制作的基本方法 3、熟悉2种常用培养基的制作过程二、实验原理 培养基是按照微生物生长发育的需要，用不同组分的营养物质调制而成的营养基质。人工制备培养基的目的，在于给微生物创造一个良好的营养条件。把一定的培养基放入一定的器皿中，就提供了人工繁殖微生物的环境和场所。 自然界中，微生物种类繁多，由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究上的目的不同，所以培养基在组成原料上也各有差异。但是，不同种类和不同组成的培养基中，均应含有满足微生物生长发育的水分、碳源、氮源、无机盐和生长素以及某些特需的微量元素等。此外，培养基还应具有适宜的酸碱度（pH值）和一定缓冲能力及一定的氧化还原电位和合适的渗透压。 根据制备培养基对所选用的营养物质的来源，可将培养基分为天然培养基、半合成培养基和合成培养基三类。按照培养基的形态可将培养基分为液体培养基和固体培养基。根据培养基使用目的，可将培养基分为选择培养基、加富培养基及鉴别培养基等。培养基的类型和种类是多种多样的，必须根据不同的微生物和不同的目的选择配制。 固化体培养基是在液体培养基中添加凝固剂制成的，常用的凝固剂有琼脂、明胶和硅酸钠，其中以琼脂最为常用，其主要成份为多糖类物质，性质较稳定，一般微生物不能分解，故用凝固剂而不致引起化学成份变化。琼脂在95°C的热水中才开始融化，融化后的琼脂冷却到45C才重新凝固。因此用琼脂制成的固体培养基在一般微生物的培养温度范围内（25C-37C）不会融化而保持固体状态。 三、实验器材 1、药品琼脂，1NNaOH溶液，1NHCl溶液，牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号合成培养基和马铃薯蔗糖培养基的配方药品； 2、材料具刻度1000毫升塘瓷盅，铝锅，天平，20X200mm试管，量筒，小烧杯，玻璃棒，骨匙，pH试纸，分装漏斗，试管盒，纱布，棉花，报纸，麻绳，标签。 四、操作步骤 1、计算称量根据配方，计算出实验中各种药品所需要的量，然后分别称（量）取。 2、溶解一船情况下，几种药品可一起倒入烧杯内、先加入少于所需要的总体积水进行加热溶解（但在配制化学成分较多的培养基时，有些药品，如磷酸盐和钙盐、镁盐等混在一起容易产生结块、沉淀，故宜按配方依次溶解。个别成分如能分别溶解，经分开灭菌后混合，则效果更为理想）。加热溶解时，要不断搅拌。如有琼脂在内，更应注意。待完全溶解后，补足水分到需要的总体积。 3、调节pH用滴管逐滴加入1NNaOH或lNHCl边搅动；边用精密的pH试纸测其pH值，直到符合要求时为止。pH值也可用pH计来测定。 4、过滤要趁热用四层纱布过滤。 5、分装按照实验要求进行分装。装入试管中的量不宜超过试管高度的1/5，装入三角烧瓶中的量以烧瓶总体积的一半为限。在分装过程中，应注意勿使培养基沾污管口或瓶口、以免弄湿棉塞，造成污染。 图V-1培养基的分装装置与棉塞。 培养基的分装棉塞的做法： 1.正确；2.管内太短，外部太松；3.整个棉塞太松4.管内太紧，外部太短松 6、加塞培养基分装好以后，在试管口或烧瓶口上应加上一只棉塞。棉塞的作用有二一方面阻止外界微生物进入培养基内，防止由此而引起的污染；另一方面保证有良好的通气性能，使微生物能不断地获得无菌空气。因此棉塞质量的好坏对实验的结果有很大影响。 7、灭菌在塞上棉塞的容器外面再包一层牛皮纸，便可进行灭菌。培养基的灭菌时间和温度，需按照各种培养基的规定进行，以保证灭菌效果和不损坏培养基的必要成分。如果分装的斜面，要趁热摆放并使斜面长度适当（为试管长度1/3-1/2,不能超过1/2）。培养基经灭菌后，应保温培养2-3天，检查灭菌效果，无菌生长者方可使用。 6.制作斜面培养基和平板培养基 8、斜面培养基和平板培养基 培养基灭菌后，如制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行。 （1）斜面培养基在实验台上放1支长0.5?1米左右的木条，厚度为1厘米左右。将试管头部枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基。 (2)平板培养基将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入10毫升，以铺满皿底为度。铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，再5个培养皿一叠，倒置过来，平放在恒温箱里，24小时后检查，如培养基末长杂菌，即可用来培养微生物。 五、注意事项 1、配制固体培养基用的琼脂应先行用冷水浸泡，纱布过滤，在调好pH值后加入。 2、配制高氏一号合成培养基时应小心溶解淀粉，不要成团。 3、制备含琼脂的固体培养基应，先将琼脂加热融化后再加入水溶性的糖等物质六