实验16酶的特异性和影响酶反应速度的因素.docx

实验16酶的特异性和影响酶反应速度的因素一、目的1、了解酶的特异性。 2、了解温度、pH值、激活剂和抑制剂等因素对酶反应速度的影响。 3、掌握检查酶的特异性，酶的激活剂和抑制剂影响酶反应速度的方法及原理。 4、学习测定酶最适pH值的方法。 二、原理酶是生物体中具有催化功能的蛋白质，因此也叫生物催生剂。生物体内存在多种多样的酶,从而使生物体在温和的条件下能迅速完成复杂的生物化学反应。 酶具高度的特异性。所谓特异性是指一种酶能对一种化合物或一类化合物起催化作用，而不能对别的物质发生催化反应。 淀粉和蔗糖无还原性。唾液淀粉酶水解溶粉生成有还原性的麦芽糖，但不能催化蔗糖水解。蔗糖酶能催化蔗糖水解产生还原性的葡萄糖和果糖，但不能催化淀粉水解，用Benedict试剂检查糖的还原性。 温度和pH对酶的活性有显著的影响，使反应速度达最大反应值时的温度称为某种酶作用的最适温度。大多数动物酶的最适温度为37笆~40们植物酶的最适温度为50°C~60°C，能使酶表现其活性最高时的pH值称为该酶的最适pH值，不同酶的最适pH值不同。 酶的活性常受某些物质的影响，能使酶活性增加的物质称为酶的激活剂，能使酶的活性降低的物质称为酶的抑制剂。氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂。 三、材料、试剂与器具 （一）材料1、干酵母2、黄豆粉 （二）试剂1、2%蔗糖溶液：蔗糖是典型的非还原糖，若商品蔗糖中还原糖含量超过一定标准，则呈现还原性，这种蔗糖不能使用，所以实验必须进行检查，本实验用的蔗糖至少应是分析纯的试剂。 2、0.3%氯化钠的1%淀粉溶液（新配制）。 3、释释200倍的新鲜唾液（5滴唾液，加蒸馅水稀释至50毫升）。 4、蔗糖酶溶液：取干酵母100克，置于乳钵内，加适量的蒸馅水和少量石英砂，用力研磨提取1小时，再加蒸饲水使总体积约500毫升，过滤，将滤液保存于冰箱备用。 5、本尼迪克特试剂（Benedict）：将硫酸铜17.3克溶于100亳升热蒸馅水中，冷却，稀释至150亳升，取柠檬酸钠173克及无水碳酸钠（Na2CO3）100克，加水600亳升，加热使之溶解，冷后后稀释至850毫升。最后把硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠一碳酸钠溶液中，摇匀,用细「I瓶贮存，此试剂可以保存很久。 6、0.1%淀粉溶液。 7、1%氯化钠溶液。 8、1%硫酸铜溶液9、1%的硫酸钠溶液10、碘化钾一碘溶液（稀）。 11、0.3%毓化钠0.2%淀粉溶液。 12、1%尿素溶液 13、腿酶提取液：取黄豆粉6克，加30%乙醇250亳升，振荡10分钟，过滤，可保存1~2星期。 14、奈斯勒试剂：称取5克碘化钾，溶于5亳升蒸馅水中，加入饱和氯化汞溶液（100亳升约溶解5.7克氯化汞）并不断搅拌。直至产生的朱红沉淀不再溶解时，再加40毫升50%氢氧化钠溶液，稀释100亳升，混匀，静置过夜，倾出清液于棕色瓶中。 15、0.3%氯化钠的0.5%淀粉溶液（新配制）16、0.2M磷酸氢二钠溶液17、0.1M柠檬酸溶液 （三）器具1、试管及试管架2、移液管（1,2,5毫升）3、冰浴4、恒温水浴5、白瓷板6、秒表四、操作步骤 （一）酶的特异性1、淀粉酶的特异性实验取试管6支，编号，按下表进行操作管号1234561%淀粉溶液（滴）42%蔗糖溶液(滴)444稀释唾液(ml)11煮沸过的稀释唾液(ml)11蒸馋水(ml)137°C恒温水浴15分钟Benedicty试剂（ml）222222沸水浴2~3分钟现象解释结果2、蔗糖酶的特异性实验取试管6支，编号，按卜.表进行操作管号 （滴）（滴）(ml)234561%淀粉溶液4442%蔗糖溶液444蔗糖酶溶液11 煮沸过的蔗糖酶溶液(ml)11蒸馅水(ml)1137°C恒温水浴15分钟Benedict试剂(ml)222222沸水溶2-3分钟现象 解释结果 (-)酶的激活剂及抑制剂取试管4支，编号，按下表加入试剂管号12340.1%淀粉溶液(ml)3333稀释唾液(ml)1 11%硫酸铜溶液(ml)11%毓化钠溶液(ml)11%硫酸钠溶液(ml)1蒸馋水(ml)137°C恒温水浴、保温10分钟碘化钾一一碘溶液(滴)2-32-32~32~3现象解释结果说明本实验第3管的意义。 （三）温度对酶活性的影响1、温度对唾液淀粉酶活性的影响唾液淀粉酶可■将淀粉逐步水解成各种不同大小分子的糊精及麦芽糖。它们遇碘各呈不同的颜色。直链淀粉（即可溶性淀粉）遇碘呈蓝色，糊精按分子从大到小的顺序遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色和红色，最小的糊精和麦芽糖遇碘不呈颜色。由于不同温度下.唾液淀粉酶的活性高低不同，则淀粉被水解的程度不同。所以，可由酶反应混合物遇碘所呈现颜色来判断。 取3支试管，编号后各加0.3%氯化钠的0.2%的淀粉溶液2亳升。将第1、2号试管放入37°C恒温水浴中保温，第3号试管放入冰水