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含乳饮料及其乳原料中酪蛋白含量的测定BJS 201915
1范围
本方法规定了含乳饮料及其原料中酪蛋白四种亚型asi-酪蛋白、as2-酪蛋白、B-酪蛋白、k-酪蛋 白含量测定的方法。
本标准适用于含乳饮料及其原料中酪蛋白总含量的测定,不适用于发酵法、酶解法、水解法等 工艺对蛋白质改性的样品。
2原理
试样溶液中的酪蛋白采用等电点沉淀后复溶,用胰蛋白酶进行酶解,同时加入同位素内标,C18 水相柱分离,采用液相色谱-串联质谱仪检测,内标法定量。
3试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
试剂
浓盐酸(HC1)。
甲酸(CH2O2):质谱级。
醋酸(CH3COOH):色谱级。
孝典善膏白=C&Mt熨x fl x f2 x f3
错误!未找到引用源。错误!未找到引用源。错误!未找到引用源。(10 mL);
错误!未找到引用源。
错误!未找到引用源。
错误!未找到引用源。
(10 mL);
错误!未找到引用源。
(步骤5.1中)从溶解的试样中抽取用于
式中:
错误!未找到引用源。 一(步骤5.1中)50 mL试样溶解液中各酪蛋白亚型的蛋白浓度aSl-、
aS2-> [3-、K-, 单位为 pmol/L;
错误!未找到引用源。 一经标准曲线计算后各酪蛋白亚型的肽段浓度,即代表各酪蛋白
亚型蛋白浓度,单位为|imol/L;
—(步骤5.5中)试样酶解后的定容体积,单位为mL (1mL);
—(步骤5.5中)试样稀释液的酶解体积,单位为mL (0.2 mL);
(步骤5.2中)复溶试样中沉淀蛋白的溶液体积,单位为mL
沉淀蛋白的溶解液体积,单位为mL (10mL);
错误!未找到引用源。—(步骤5.3中)Bradford或BCA法测定后,稀释复溶
错误!未找到引用源。
蛋白溶液的稀释因子。
试样溶液中各酪蛋白亚型的含量计算
试样中各酪蛋白亚型的含量按式(2)计算:
Xi=错误!未找到引用源。 (2)
式中:
Xi —试样中各酪蛋白亚型的含量aSl-、aS2-、供、K-,单位为g/100g或g/100mL;
错误!未找到引用源。一(公式1中)试样溶解液中的各酪蛋白亚型浓度aSl-、aS2-、。-、K-, 单位为|imol/L;
M 一 aSl-> aS2-> 0-、k-酪蛋白的相对分子量(附录A表A.2),单位为g/mol;
错误!未找到引用源。一溶解样品的溶液体积,单位为mL (50mL);
m 一试样质量或体积,单位为g或者mL。
注:试样中各酪蛋白亚型的含量需按照附录A表A.2中的蛋白分子量计算。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留两位有效数字。
总酪蛋白含量计算
试样中酪蛋白总含量按式(3)计算:
A=错误!未找到引用源。⑶
A —试样中各种酪蛋白亚型含量的总和,即试样中酪蛋白的总含量,单位为g/100g或
g/100mL;
错误!未找到引用源。 一试样中aSl-型酪蛋白的含量,单位为g/100g或g/100mL;
错误!未找到引用源。 一试样中aS2-型酪蛋白的含量,单位为g/100g或g/100mL;
错误!未找到引用源。 一试样中供型酪蛋白的含量,单位为g/100g或g/100mL;
错误!未找到引用源。 一试样中K-型酪蛋白的含量,单位为g/100g或g/100mL。
7精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%o
8其他
本方法的特征肽段、粉状及液体含乳饮料、粉状及液体乳原料的检出限与定量限如下表4所示:
表4仪器、方法检出限及定量限
特征肽段仪器LOD/LOQ
asi-型酪蛋白 nmol/L
as2 一型酪蛋白 nmol/L
p-型酪蛋白 nmol/L
K .型酪蛋白 nmol/L
检出限LOD
1
1
1
1
定量限LOQ
3
3
3
3
粉末状含乳饮料方法LOD/LOQ
(以5g试样称取,50mL溶液定容计算)
asi-型酪蛋白
%/g
(XS2-型酪蛋白
Ng/g
P-型酪蛋白
胆g
K-型酪蛋白
Hg/g
检出限LOD
0.25
0.26
0.25
0.21
定量限LOQ
0.74
0.78
0.75
0.64
液体状含乳饮料方法LOD/LOQ
(以10mL试样量取,50mL溶液定容计算)
asi-型酪蛋白
gg/mL
as2-型酪蛋白
gg/mL
B-型酪蛋白
pg/mL
K-型酪蛋白
|ig/mL
检出限LOD
0.12
0.13
0.13
0.11
定量限LOQ
0.37
0.39
0.38
0.32
粉末状乳原料方法LOD/LOQ
(以1g试样称取,50mL溶液定容计算)
as「型酪蛋白
Ftg/g
as?-型酪蛋白
咽g
佚型酪蛋白
四g/g
K-型酪蛋白
咽g
检出限LOD
1.2
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