紫外线杀菌效果实验设计.docVIP

实验设计： 紫外杀菌效果的检测 原理： 紫外线主要是通过对微生物(细菌、病毒、芽孢等病原体) 的辐射损伤和破坏核酸的功能使微生物致死，从而达到消毒的目的。紫外线对核酸的作用可导致键和链的断裂、股间交联和形成光化产物等，从而改变了DNA的生物活性，使微生物自身不能复制，这种紫外线损伤也是致死性损伤。真空紫外光穿透能力极弱，灯管和套管需要采用极高透光率的石英。 不同种类的微生物对紫外线的敏感性不同,消毒时必须使用能杀灭目标微生物所需的照射剂量,其抵抗力由大到小排列次序为真菌孢子> 细菌芽孢> 细菌繁殖体。杀灭细菌繁殖体时照射剂量应达到1 0 0 0 0μW·s/ cm2 ;杀灭细菌芽孢时应达到100 000μW·s/ cm2 。病毒对紫外线的抵抗力介于细菌繁殖体和芽孢之间,真菌孢子的抵抗力比细菌芽孢更强,有时需照射剂量达到600 000 μW·s/ cm2 。在消毒目标微生物不详时, 照射剂量不应低于1 0 0 0 0 0μW·s/ cm2 。紫外线灯的辐射强度随距灯管距离的增加而降低。 紫外线杀菌效率还受到温度和湿度的影响，作用各有不同，有待进一步的探讨研究。 主要仪器设备： 实验一（菌种和杀菌时间、温度不同紫外线杀菌效率不同）实验装置 外围为特制的透明玻璃器皿紫外线灯管(开)隔板 外围为特制的透明玻璃器皿 紫外线灯管(开) 隔板 DCBA D C B A 平行样 温度35℃和湿度都保持平衡不变 平行样 实验二（距离不同紫外线杀菌效率不同）实验装置 菌种样 菌种样 紫外线灯管 紫外线灯管 实验仪器： 高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、电热干燥箱、振荡培养箱、试管、 三角瓶、 烧杯、 量筒、 玻璃棒、 天平、 药匙、 pH试纸(1-14)、橡胶塞、 棉塞、记号笔 、皮筋 、报纸 、培养皿（中） 、移液管（1ml）、玻璃珠、吸水纸、电炉、接种环、镊子、搪瓷杯、酒精灯、菌落计数器、放大镜、一些遮阳伞的布料、报纸 药品及试剂： 营养琼脂（或牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂粉、10%NaOH，10%HCl） 大肠杆菌（革兰氏阴性菌，44103）、枯草芽孢杆菌（芽孢杆菌，11060）、金黄色葡萄球菌（革兰氏阳细菌，slv-350） 新的紫外灯 实验路线方法（实验方案）： 实验前的准备 玻璃器皿的准备 玻璃器皿在实验前必须洗涤干净，根据实验要求准备相应数量，移液管、培养皿等包装好后灭菌。可采用干热灭菌法处理。 2、培养基的准备 1 ）称量：直接称量一定量的营养琼脂 2 ）熔化：在沸水浴锅中加热熔化。 3 ）调pH：10%NaOH，10%HCl调pH至7.4-7.6。 4 ）分装：将溶化的固体培养基趁热加至漏斗上，装试管时，装量不超过试管的1/4，注意管口不要沾上培养基。 5）加塞：试管应先捆成一捆，然后再于棉塞外包扎牛皮纸，贴上标签，注明培养基名称、日期、组别。 6）将培养基、无菌水放入高压蒸汽灭菌锅内，湿热灭菌。 3、无菌水的制备 用量筒量取150ml自来水于带玻璃珠三角瓶中，塞上棉塞，包扎报纸（4层）。 菌种的活化 从大肠杆菌的样菌中用接种环在无菌操作下接种到斜面培养基上放入恒温培养箱中培养24小时左右，菌种长得比较好。再次将菌接种到新的斜面培养基上培养24小时。 金黄葡萄球菌和枯草芽孢杆菌重复上述操作。 菌种稀释 取出经过两次接种培养的大肠杆菌，用接种环刮下一点点放入盛有100ml无菌水的带有玻璃珠的三角瓶中，入振荡培养箱中振荡摇匀20min，使菌种和水充分混合，取1支1ml无菌移液管从三角瓶中吸取1ml（此操作要求无菌操作），加入另一盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推分别制成0.1、0.01、0.001、0.0001等不同稀释度的土壤溶液。 将不同稀释倍数的菌液进行稀释平板法后培养一段时间，将菌液cpu计数，找到数量在30~300数目间的稀释倍数的菌液。 做样板 将数量在适宜范围内的稀释后的菌液，用0.5ml的无菌移液管在无菌操作和环境下将菌液移到无菌平皿里，再将融化的培养基冷却到室温后在无菌操作下倒入平皿中，然后放在平稳的桌面上进行缓慢的顺时针的旋转直至培养基凝固。按上述方法做32个样板。 金黄葡萄球菌和枯草芽孢杆菌重复上述操作，但都只做10个样板。 实验一 实验前，将装置一的紫外灯打开一段时间进行装置内的消毒 将大肠杆菌平板分成5组，放在不同层，其中一组带着皿盖还包着一层遮阳伞的布料放入其中，其他四组a/b/c/d分别打开皿盖放入装置内，待一分钟后将a组盖上皿盖和布料，2min后b组，7min后c组，20min后关掉紫外灯。 将枯草芽孢杆菌和金黄葡萄球菌依次重复2操作，得到平板。 将装置的温度改成5℃，取10