细胞凝集反应实验报告.pdf

细胞生物学实验报告 一． 实验名称：细胞凝集反应 二． 实验原理： 细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表 面的分支状糖外被。目前认为：细胞间的联系，细胞的生长和分化，免疫反 应和肿瘤发生都和细胞表面的分支状糖分子有关。 凝集素（lectin ）是一类含糖的（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质， 它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞 表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可 以抑制细胞的凝集。 凝集素是指一种从各种植物，无脊椎动物和高等动物中提纯的糖蛋白或结 合糖的蛋白，因其能凝集红血球(含血型物质)，故名凝集素。常用的为植物 凝集素(Phytoagglutin, PNA)，通常以其被提取的植物命名，如刀豆素 A(Conconvalina,ConA)、麦胚素(Wheat germ agglutinin, WGA)、花生凝集素 (Peanut agglutinin, PNA)和大豆凝集素(Soybean agglutinin, SBA)等，凝集素是它 们的总称。凝集素不是来源或参与免疫反应的产物，它们具有的某些“亲合” 特性，能被免疫细胞化学技术方法所应用。 血型鉴别实验，也是凝集反应的一种。 三． 实验用品： 土豆块茎 显微镜，粗天平，载玻片，滴管2 支，离心管2 支 PBS 缓冲液：称取NaCl7.2g，Na HPO 1.48g,KH PO 0.43g,加蒸馏水，定容至 2 4 2 4 1000ml，调pH 值到7.2. 4.2% 的红细胞 四． 实验步骤： 1. 称取土豆去皮块茎2g，加10mlPBS缓冲液，浸泡2h，浸出的粗提液中含 有可溶性土豆凝集素。 2. 以无菌方法抽取兔子静脉血液（加抗凝剂），加生理盐水3ml，在 1000r/min，离心5min，重复3次离心，最后按压积红细胞体积用生理盐 水配成1%红细胞液。 3. 分别用滴管吸取土豆凝集素和1%红细胞液各一滴，置双凹片左孔内，充 分混匀。 4. 同时分别用滴管吸取PBS缓冲液和1%的红细胞悬液各一滴，置双凹片右 孔内，充分混匀，做对照实验。 5. 摇晃5—10min后，观察有无发生细胞凝集并置显微镜下观察。 五． 实验结果： 试剂 土豆凝集素 PBS缓冲液 在振荡过程中，溶液中 在振荡过程中，红细胞 的红细胞渐渐凝集成颗 不断向中间靠拢，最终 现象 粒状，逐渐聚拢，最后 形成中间颜色较深，边 在液滴中形成一大块血 缘颜色较浅的红细胞浑 红色血块。 浊溶液。 结果 红细胞发生凝集 红细胞未发生凝集 土豆凝集素可使血液发生凝集，PBS缓冲液不能使 说明结论 血液发生凝集。 图左为PBS缓冲液对照 图右为土豆凝集素 图一 图二 土豆凝集素（*4） 图一中为在振荡了11min后，细胞凝集的现象，中间凝结成血块，周围 叫澄清，边缘为干涸的红细胞凝结成的颗粒附着在玻片上。在低倍镜（*4） 下观察，可以看到红细胞凝结成块状，周围液体近乎透明，说明红细胞发生 了凝集。