杂交兰种苗组培快繁技术规程.pdfVIP

DB3301/T XXXX—XXXX 杂交兰种苗组培快繁技术规程 1 范围 本文件规定了杂交兰种苗组培扩繁的组培苗培养、组培苗驯化移栽、质量等级、包装、标签和运输 的要求。 本文件适用于杂交兰种苗组培扩繁至驯化栽培的生产过程。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本 （包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 8321 （所有部分） 农药合理使用准则 NY/T 496—20 10 肥料合理使用准则 通则 NY/T 1276—2007 农药安全使用规范 总则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 杂交兰 Cymbidium hybrid 由国兰和大花蕙兰种间杂交选育的一类兰花杂交种。 类原球茎 protocorm-like bodies 兰花外植体诱导培养时，茎尖生长点组织逐渐膨大形成的、可发育成完整试管苗的扁形球状物。 4 组培苗培养 外植体的选择和处理 4.1.1 母株的预处理 于春秋季，宜使用50%多菌灵可湿性粉剂800倍液等广谱杀菌剂，对长势均匀、无病虫害且带有新 生芽的健康母株进行灌根处理，每隔3天1次，连续处理2次～3次，放置于通风良好、清洁、干燥的 环境，温度宜15 ℃～25 ℃，光照宜8000 lux～12000 lux。 4.1.2 外植体的选取 母株基质干透后，选择苞叶尚未展开、露出基质表面2 cm～6 cm 的新生芽，从基部切断取下，置 于无菌样品袋中带回实验室。 1 DB3301/T XXXX—XXXX 4.1.3 外植体消毒 4.1.3.1 用洁净的软毛刷轻刷外植体表面，去除表面污垢，浸入洗洁精等清洁剂中震荡清洗50min～ 80 min，再流水充分冲洗，置于超净工作台上。 4.1.3.2 剥去1片～2片外苞叶，75%酒精浸泡消毒90 s，无菌水清洗2次～3次。 4.1.3.3 再剥去1片～2片外苞叶，浸入10% NaClO溶液，加入2滴～3滴吐温20，处理10 min，无 菌水清洗3次～4次。 4.1.3.4 浸入0.1% HgCl溶液，加入2滴～3滴吐温20，根据芽的大小灭菌15 min～17 min，无菌水2 清洗5次～6次。 4.1.3.5 再剥去1片～2片外苞叶，将剥离的芽浸入0.05%HgCl溶液中消毒60s，无菌水清洗5次～2 6次。 初代培养 4.2.1 接种 取消毒后的芽，剥离0.3 cm～0.5 cm 的茎尖组织接种于初代培养基诱导类原球茎。 4.2.2 培养基 培养基配方宜为：1/2MS + 1 mg/L 6-BA + 1 mg/L IBA+ 1 g/L活性炭+ 30 g/L蔗糖+ 5 g/L琼脂， pH值 5.6～5.8。 4.2.3 培养条件 光照16 h/d，光照强度500 lux～1000 lux，温度 （25±1）℃；暗培养时温度为 （20±1）℃。 继代培养 4.3.1 转接 初代培养60d后，将诱导形成的类原球茎分割为体积约0.4 cm × 0.4 cm × 0.4 cm 的团块，接 种于继代培养基上，每隔60 d～75 d继代一次，分割时去除类原球茎上分化的芽和根，继代次数不宜 超过 12 代。 4.3.2 培养基 培养基配方宜为：Hyponex 1 （花宝1号）+ 0.5 mg/L 6-BA + 0.5 mg/L NAA + 50 g/L香蕉泥+ 2 g/L水解酪蛋白+ 1 g/L活性炭+ 30 g/L蔗糖+ 5 g/L琼脂，pH值 5.6～5.8。 4.3.3 培养条件 光照16 h/d，光照强度500 lux～1000 lux，温度 （25±1）℃；暗培养时温度为 （20±1）℃。 分化培养 4.4.1 转接 将增殖的类原球茎分割为体积约0.4 cm × 0.4 cm × 0.4 cm 的团块，转接至分化培养基上分化 成芽，类原球茎之间的距离不宜少于1.5 cm。 4.4.2 培养基 2