水产品中磺胺类药物检测能力验证质量控制分析.docx

? ? 水产品中磺胺类药物检测能力验证质量控制分析 ? ? ◎ 冯慧慧，杨亚琴，余明霞，曹 秀，李圆圆，郝学飞 （河南省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，农业农村部农产品质量安全风险评估实验室（郑州），河南 郑州 450002） 磺胺类药物是对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称，因其具有性质稳定、抗菌谱广、杀菌效果好、使用方便和价格低廉等优点，在水产品养殖过程中仍然广泛使用，主要用于预防和治疗鱼、虾、蟹等动物的细菌感染性疾病[1-2]。由于磺胺类药物在生物体内作用时间和代谢时间较长，在水产品体内蓄积到一定浓度，经食用后会对人体产生毒副作用，引发排尿和造血紊乱等副作用和过敏反应，使免疫功能下降，致残、致畸、致突变，并且可能产生致癌作用[3]。因此，我国以及美国、欧盟等多数国家对食品中磺胺类药物残留最高限量均有明确规定，如我国《食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量》（GB 31650—2019）规定所有食品动物肌肉、脂肪、肝和肾中磺胺类药物的最大残留限量为100 μg·kg-1[4]。近年来，磺胺类药物残留的问题也越来越受社会的关注，农业农村部、各地方政府等也多次组织实施水产品例行监测、专项监测等各类抽检工作，以确保水产品质量安全。 能力验证是通过各实验室之间的比对，来对实验室能力进行考核、监督和确认的一种验证活动，它可以作为质量控制的外部补充措施，以促进实验室检测能力和质量管理水平的不断提高[5-6]。本实验室近年来也多次参加农业农村部组织的能力验证考核活动，本文以2021年参加农业农村部组织的水产品中磺胺类药物残留检测能力验证为例，检测方法推荐使用《水产品中17种磺胺类及15种喹诺酮类药物残留量的测定》（农业部1077号公告-1-2008）[7]，优化了提取溶剂和净化方式，对考核样品中磺胺类药物残留量进行测定，取得了满意的实验结果。 1 材料与方法 1.1 仪器与试剂 Shimadzu LCMS-8050液相色谱-串联质谱仪，日本岛津公司；色谱柱：C18柱（100 mm×2.0 mm，3 μm），日本资生堂公司；PGC 4502i电子天平，精确至0.01 g，艾德姆衡器（武汉）有限公司；AE 240电子天平，精确至0.01 mg，梅特勒-托利多；飞鸽GL-21B 高速冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂；RE-52AA旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂；SKQ-500DE型数控超声清洗器，昆山市超声仪器有限公司；SK-1快速混匀器，金坛市白塔新宝仪器厂；Milli-Q超纯水仪，美国Millipore公司。乙腈、甲醇：色谱纯，德国Merck公司；甲酸：色谱纯，赛默飞世尔科技公司；固相萃取净化柱：Oasis PRiME HLB，规格为500 mg/6 mL，美国Waters公司。 磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲基异噁唑、磺胺二甲异噁唑、磺胺喹噁啉、磺胺间二甲氧嘧啶、氘代磺胺邻二甲氧嘧啶-D3以及氘代磺胺间二甲氧嘧啶-D6共计10种化合物标准物质均购自德国Dr. Ehrenstorfer公司，纯度均大于99.0%。 能力验证样品：离心管包装的鲤鱼鱼糜，共3份样品（每份样品5.00 g），空白基质样品约50 g。检测样品编号为H47，由中国水产科学研究院质量标准研究中心提供。 1.2 实验方法 1.2.1 样品提取 样品充分解冻至室温，加入200 ng·mL-1混合内标标准溶液200 μL，涡旋混合1 min，避光放置1 h，再加入20 mL乙腈进行提取，涡旋混合2 min，室温下超声提取10 min，以8 000 r·min-1高速离心5 min，取上清液于50 mL烧杯中；残渣用10 mL乙腈重复提取一次，合并两次提取液，待过柱净化。 1.2.2 样品净化 将全部上清液转移至Oasis PRiME HLB固相萃取柱进行净化，保持流速1～2滴/s，收集全部滤液于梨形瓶中，40 ℃水浴旋转蒸发至近干，加入2 mL 20%甲醇水涡旋溶解残留物，过0.22 μm微孔滤膜，待上机测定。 在测定能力验证样品时，先取出一份样品按照上述方法进行预处理粗略定量。根据预实验粗略定量结果，考核样品中磺胺甲基嘧啶浓度大约为24 μg·kg-1，磺胺二甲嘧啶浓度大约为40 μg·kg-1。可根据这个量进行加标样品的制备，再根据加标样品的实测值和添加量计算出添加回收率，由此可以对考核样品的测定值进行校正，另外可以根据初测结果准确配制标准曲线浓度范围，使能力验证样品中磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲嘧啶上机液浓度涵盖在标准曲线范围内，且在标准曲线的中区值，使定量结果更加准确。 1.2.3 样品检测 （1）色谱条件。色谱柱：资生堂C18柱（100 mm×2.0 mm，3 μm）；柱温：40 ℃；进样体积：2 μL；流动相A路：5 mmol·L