NY_T 1185-2018马流行性感冒诊断技术.pdf

ICS 11.220B 41NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1185—2018代替NY/T1185—2006马流行性感冒诊断技术Diagnostic techniques for equine influenza2018-06-01实施2018-03-15发布中华人民共和国农业部发布 NY/T1185—2018目次前言引言1范围2规范性引用文件3生物安全措施4临床诊断.5实验室诊断6综合判定附录A(规范性附录)溶液的配制附录B(规范性附录)抗原和血清的处理.........T NY/T 1185—2018前 言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准代替NY/T1185—2006《马流行性感冒诊断技术》。与NY/T1185—2006相比，除编辑性修改外主要技术变化如下：“引言”部分更正马流行性感冒为三类动物疫病；“病毒分离与鉴定”部分增加收获尿囊液的过程描述（见5.2.5）；“病原分离”部分对血凝试验结果判定进行修正（见)；一增加了对马流行性感冒病毒核酸鉴定的RT-PCR方法（见5.3)；增加了马流行性感冒抗体单放射免疫扩散溶血试验（见5.5）。本标准由农业部兽医局提出，本标准由全国动物卫生标准化技术委员会（SAT/TC181)归口。本标准起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、北京市农林科学院畜牧兽医研究所、中国兽医药品监察所。本标准主要起草人：王晓钧、郭巍、戚亭、林健、毛娅卿、蒋桃珍、杨志远I NY/T 1185—2018引言马流行性感冒(Equineinfluenza，EI)是由马1型（H7N7亚型）或马2型（H3N8亚型）流行性感冒病毒(Equineinfluenzavirus,EIV)引起的传染性极强的急性呼吸系统疾病。自然条件下，只有马属动物易感，包括马、驴、骤，其中马最易感，临床症状最明显。本病发病突然，主要经含有病毒的气溶胶或飞沫传播，疫情发展迅速，可在短时间内传染马群。本病的潜伏期为1d～3d，主要症状为发热，流浆液性或脓性鼻汁，眼部见泪痕或分泌物，咳嗽。一般发病马7d～15d后即可恢复健康。本病死亡率较低，如果继发细菌感染，可引起肺炎等严重症状导致死亡。本病一年四季均可发生。我国《一、二、三类动物疫病病种名录》（中华人民共和国农业部公告第1125号)将该病确定为三类动物疫病，是进出口马检疫必检疫病。I NY/T 1185—2018马流行性感冒诊断技术1范围本标准规定了马流行性感冒的临床诊断、病原分离、血凝试验(HA)、H3N8亚型马流感病毒核酸的RT-PCR、血凝抑制试验(HI)、单放射免疫扩散溶血试验(SRH)的技术要求本标准适用于马流行性感冒的流行病学调查、临床诊断和实验室诊断。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求3生物安全措施进行马流行性感冒实验室诊断时，如病毒分离、血清处理等，按照GB19489的规定执行。4临床诊断4.1轻症型此种病型常见，主要表现为轻度咳嗽，流水样或浆液性鼻汁，体温稍升高或正常，眼结膜潮红，一般经1周后康复。4.2重症型患马突然发病，表现精神委顿、食欲减退、肌肉疼痛、不愿活动。体温升高至39℃以上，稽留3d～4d，发热的同时出现阵发性咳嗽，初为干咳，后可转为湿咳，有冷空气或尘埃刺激时会出现剧烈咳嗽。初期为流浆液性或黏液性鼻汁，后期为黄白色脓性鼻汁。鼻黏膜潮红，眼结膜充血肿胀，流泪，分泌物增多。呼吸加快，有的出现心律不齐，四肢下端或腹下发生浮肿。5实验室诊断5.1样品采集与运输5.1.1样品的采集每个发病群至少选择5匹病畜采集样品，少于5匹则全部采集样品。应在临床症状出现后立即采集深部鼻拭子。取样时须将脱脂棉拭子经前侧鼻道伸人鼻腔深部蘸取呼吸道黏液，取出后立即放入盛有1mL～2mL运输培养液（见附录A中的A.1)的青霉素瓶或带盖塑料管中。血清应采集双份，间隔10d~14d。5.1.2样品的运输与储存鼻拭子样品在2℃～8℃时可保存1d～2d,若要长期保存，则应放置于一70℃以下。运送样品时应加冰块或冰袋冷藏运输。血清储存应置于一20℃以下。5.2病毒分离与鉴定1 NY/T1185—20185.2.1仪器设备恒温培养箱、孵化器、恒温水浴锅、普通冰箱、超低温冰柜、台式离心机。5.2.2试验材料96孔V型或U型微量反应板、微量移液器、1mL注射器和5mL注射器、长柄棉拭子（20cm以上）、青霉素瓶等。除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂。实验用水应符合GB/T6682的规定。甘油、青霉素、链霉素、丁胺卡那霉素、0.01mol/LpH为7.2的磷酸盐缓冲