胞培养和离心技术课件.pptxVIP

细胞培养和离心技术;应用实例：;分化潜能 （组织;研究的层次;;培养的人骨肉瘤细胞 ;细胞培养技术;一、 细胞培养的基本知识;1.细胞培养(cell culture);体内、外细胞的差异;特点 对环境适应差；容易污染； 对营养要求高； 大部分需要附着载体生长； 可能失去原有的形态功能特征。;2.培养细胞的生存条件;营养物质;常用合成培养基;环境条件;培养皿 (dish);培养容器的容积、细胞数;二氧化碳培养箱（细胞培养孵育用）;成功的细胞培养： 1.Well-established,properly equiped cell culture facility; 2.Practice of sterile techniques; 3.Appropriate,quality controlled reagents and supplies; 4.The knowledge and practice of the fundamental techniques involved in the growth of the cell type of interest.; 1. 贴附型 (adhensive cell) 贴附于支持物表面，单层生长； 失去在体内原有形态， 反映胚层起源情况； 有接触抑制和密度依赖特征。 大多数细胞属此型； 2. 悬浮型 (suspensory cell) 不贴附在支持物表面，以悬浮状态生长；， 单个分散或成团。 各种源自血液的细胞、骨髓、脾细胞。;MRC-5 人肺成纤维细胞;体外培养的细胞,应注意： 形态：贴壁、悬浮 来源：人、鼠、其他 分化程度：肿瘤细胞、正常细胞、胚胎干细胞;4.培养细胞的增殖过程; 群体中 1.多数细胞处于间期，少数处于分裂期。 2.间期较长，分裂期较短。;培养细胞一代的增殖过程;;培养细胞的生命期;Life span;Hayflick极限;Hayflick极限提示的意义;细胞培养四大要素;二、 细胞培养的基本技术;细胞培养的基本技术;1.细胞分离;2.细胞传代 （subculture);肿瘤细胞株的传代;应用计数板或活力检测仪;4.细胞观察(Observation); ; 在不加保护条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水会形成结晶，影响细胞功能甚至死亡，冻存失败。 * 培养基中加入保护剂: 甘油或二甲基亚砜（DMSO）； * 缓慢地冻结； * 贮存在－130℃以下低温。;细胞复苏(Thawing, Reconstitution);6.细胞污染的防治;微生物污染的途径 ; 微生物污染对细胞的影响 致死、增殖减慢、基因转录改变、功能改变 微生物污染的检测 培养基颜色、性状；细胞形态、功能；支原体的检测 微生物污染的防治 抗生素、加温等 以预防为主，一旦感染较难救治;三. 常见问题;1.支原体感染细胞救治;; Reputable cell suppliers： 1. American Tissue Type Collection (ATCC) 2. German Collection of Microorganisms and Cell Culture (DSMZ) 3. 中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库 （中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心）; p53，Ras等癌基因、抑癌基因的状态： 缺失、突变或野生； 2.人种、年龄等 3.病史等等，如病毒感染史;成功的细胞培养： 1.Well-established,properly equiped cell culture facility; 2.Practice of sterile techniques; 3.Appropriate,quality controlled reagents and supplies; 4.The knowledge and practice of the fundamental techniques involved in the growth of the cell type of interest.;四. 细胞活力检测