流式细胞术及其应用.ppt

流式细胞术及其应用; 第 一 部 分 流式细胞术的一般介绍;概念;流式细胞仪特点;流式细胞发展史;流式细胞发展史;流式细胞仪及其工作原理;FACSCalibur;BD LSR;FACS Vantage DiVa;FACSAria;本校FACSCalibur;流式细胞仪检测范围;临床研究;基础研究;流式细胞仪的工作原理;激光光源;氩离子激光器的发射光谱中，绿光514nm和蓝光488nm的谱线最强，约占总光强的80%；氪离子激光器光谱多集中在可见光部分，以633nm较强。 免疫学上使用的一些荧光染料激发光波长在550nm以上，可使用染料激光器。将有机染料做为激光器泵浦的一种成份，可使原激光器的光谱发生改变以适应需要即构成染料激光器。例如用氩离子激光器的绿光泵浦含有Rhodamine 6G水溶液的染料激光器,则可得到550～650nm连续可调的激光，尤在590nm处转换效率最高，约可占到一半。;Longpass Shortpass Bandpass; 光收集系统：光电倍增管（PMT）;;;液流中心由单列匀速运动颗粒组成的液柱;细胞分选系统;细胞分选系统;不同分选系统;信号检测;在流式细胞术测量中，常用的是两种散射方向的散射光测量 FSC forward scatter light (“fsc”) or forward angle light scatter (“fals”). 小角散射又称前向角散射光光它反应细胞的相对大小和截面积的大小,一般说来，前向角散射光的强度与细胞的大小有关，对同种细胞群体随着细胞截面积的增大而增大；对球形活细胞经实验表明在小立体角范围内基本上和截面积大小成线性关系 ； SSC side scatter light (“ssc”) or 90° light scatter. 侧向角散射又称90度角散射光代表细胞的颗粒度和精细结构的变化. ;;信号检测--荧光信号;荧光及发光原理;;;数据显示类型;二维等高图和密度图;;;光谱交叉;荧光补偿方法;抗体使用原则; 样品 培养细胞 新鲜组织 石蜡包埋; 第 二 部 分 流式细胞术的应用; 细 胞 周 期 分 析;样品制备;建立获取模式，获取数据 （PI单染分析细胞周期，同时看凋亡）;数据分析;细胞凋亡分析 ;细胞凋亡;细胞核染色体局部凝聚;缺乏IL3诱导的细胞凋亡;Annexin V-PE/7-AAD 双染色法;检测淋巴细胞引起的细胞毒作用;;;参考资料;结束语流式细胞术及其应用; 第 一 部 分 流式细胞术的一般介绍;概念;流式细胞仪特点;流式细胞发展史;流式细胞发展史;流式细胞仪及其工作原理;FACSCalibur;BD LSR;FACS Vantage DiVa;FACSAria;本校FACSCalibur;流式细胞仪检测范围;临床研究;基础研究;流式细胞仪的工作原理;激光光源;氩离子激光器的发射光谱中，绿光514nm和蓝光488nm的谱线最强，约占总光强的80%；氪离子激光器光谱多集中在可见光部分，以633nm较强。 免疫学上使用的一些荧光染料激发光波长在550nm以上，可使用染料激光器。将有机染料做为激光器泵浦的一种成份，可使原激光器的光谱发生改变以适应需要即构成染料激光器。例如用氩离子激光器的绿光泵浦含有Rhodamine 6G水溶液的染料激光器,则可得到550～650nm连续可调的激光，尤在590nm处转换效率最高，约可占到一半。;Longpass Shortpass Bandpass; 光收集系统：光电倍增管（PMT）;;;液流中心由单列匀速运动颗粒组成的液柱;细胞分选系统;细胞分选系统;不同分选系统;信号检测;在流式细胞术测量中，常用的是两种散射方向的散射光测量 FSC forward scatter light (“fsc”) or forward angle light scatter (“fals”). 小角散射又称前向角散射光光它反应细胞的相对大小和截面积的大小,一般说来，前向角散射光的强度与细胞的大小有关，对同种细胞群体随着细胞截面积的增大而增大；对球形活细胞经实验表明在小立体角范围内基本上和截面积大小成线性关系 ； SSC side scatter light (“ssc”) or 90° light scatter. 侧向角散射又称90度角散射光代表细胞的颗粒度和精细结构的变化. ;;信号检测--荧光信号;荧光及发光原理;;;数据显示类型;二维等高图和密度图;;;