植物组织培养与细胞详解演示文稿.ppt

3.4.4 植物单细胞培养 单细胞培养（single cell culture）是从不同植物中获得单细胞无性系进行细胞杂交及研究细胞的分裂、分化、生长及发育的重要方法，并为大规模培养奠定基础。 分离的单细胞 看护培养 微室培养 平板培养 悬浮培养 单细胞无性系 当前第62页\共有108页\编于星期四\8点 1. 单细胞制备方法： 愈伤组织或悬浮培养物(常); 用纤维素酶和果胶酸酶从组织分离 （1）机械法 （2）酶解法 （3）愈伤组织诱导法 当前第63页\共有108页\编于星期四\8点 由组织器官经愈伤组织分离单细胞 步骤： 1） 诱导产生愈伤组织； 2） 愈伤组织反复继代，使组织不断增殖，提高愈伤组织松散性； 茎段 当前第64页\共有108页\编于星期四\8点 悬浮振荡培养 3）将愈伤组织在液体培养基中培养，建立悬浮培养物 优点：细胞团成小细胞团或单细胞；在培养基中均匀分布；有空气交流。 当前第65页\共有108页\编于星期四\8点 2. 单细胞培养方法 （Single cell culture） 当前第66页\共有108页\编于星期四\8点 单细胞培养常用的方法： 单细胞培养方法 看护培养法 微室培养法 固体平板培养法 液体浅层培养法 当前第67页\共有108页\编于星期四\8点 （1）看护培养法（Nurse culture） 用途：诱导形成单细胞系。 含义：指用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。 用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，并使 其生长和增殖。这个愈伤组织块称为看护愈伤组织 a.看护培养的含义及用途 当前第68页\共有108页\编于星期四\8点 （1）在一个培养瓶中加入一定量厚的固体培养基，灭菌后备用。 （2）在无菌条件下，将一小块（1cm3）活跃生长的愈伤组织接种到培养基上，再在愈伤组织块上放一片（1cm2）已灭菌的滤纸，放置一晚上。 （3）将分离的单细胞接种到培养基的滤纸上。 （4）恒温培养。 b.看护培养基本技术 当前第69页\共有108页\编于星期四\8点 优点：（1）简便易行。（2）效果好，易于成功。缺点：（1）不能在显微镜下直接观察细胞的生长过程。 c. 看护培养特点： 当前第70页\共有108页\编于星期四\8点 a. 微室培养的含义及用途 用途:主要用来观察细胞生长、分裂、形成细胞团的过程。 （2）微室培养法（Microculture） 第一节 单细胞培养 含义:将单细胞培养在少量的培养基中。 当前第71页\共有108页\编于星期四\8点 微室培养图示： 1滴含单细胞培养液 周围加石蜡油 凹穴载玻片 旁边加石蜡油 盖盖玻片 盖盖玻片 平视图 置培养皿中26~28 ℃恒温培养 当前第72页\共有108页\编于星期四\8点 b. 微室培养特点： 优点： （1）在培养过程中，可以连续进行显微观察一个细胞的生长、分裂和形成细胞团的全部过程缺点： （1）培养时间较短 当前第73页\共有108页\编于星期四\8点 （3）平板培养法（Plante Culture） a. 含义及用途： 含义: 将单个细胞与融化的琼脂培养基均匀混合后平铺一薄层在培养皿底上的培养法。 用途: 分离单细胞无性系，研究其生理、生化、遗传上的差异而设计的一种单细胞培养技术。广泛应用于细胞、原生质体及融合产物的培养。 当前第74页\共有108页\编于星期四\8点 培养基 植物叶片 单细胞 平板 可采用哪些方法？ 固体平板培养图示： 当前第75页\共有108页\编于星期四\8点 b. 特点 优点：（1）可以定点观察；（2）分离单细胞系容易；缺点：（1）培养细胞气体交换不畅。 当前第76页\共有108页\编于星期四\8点 带绿色芽点的愈伤组织 番杏分化绿苗 番杏盆栽苗 番杏无菌苗 当前第30页\共有108页\编于星期四\8点 （7）生根培养：剥离绿苗接种到（3）号培养基上诱导生根（图示）。7d后开始陆续出根，3周后可有多条须根形成，生根率达95.7%。 （8）炼苗与移栽：移栽前，敞瓶炼苗3-4d，取出洗净后，栽至装有蛭石的塑料杯中，加自来水，杯上罩上玻璃烧杯保湿，4d后昼覆夜敞，2周后可除掉玻璃杯。3周后，试管苗张出新根，再将其移入蛭石与土（2：1）的盆（图示）中。成活率为83.3%。 当前第31页\共有108页\编于星期四\8点 3.3.6 植物组织培养的应用 1. 无性系快速繁殖技术 2. 获得无病毒植株 3. 新品种培育 4. 在遗传、生理生化和病理等研究上的应用 5. 种质资源的保存 6. 产业化生产前景