医学细胞生物学.ppt

第一页，共三十五页，2022年，8月28日 第一章 医学细胞生物学概论 研究内容 研究方法 第二页，共三十五页，2022年，8月28日 第一节 医学细胞生物学研究内容 细胞生物学是从细胞、亚细胞和分子三个水平研究生命现象和本质的科学 医学细胞生物学是一门专门研究与人体医学有关的细胞生物学 形态：观察和分析细胞内各部分的超微结构和分子结构 功能：探索和揭示生命活动的具体反应过程，真正了解人体的生、老、病、死等各种生命现象。 第三页，共三十五页，2022年，8月28日 第二节医学细胞生物学的研究方法 显微技术 生物化学与分子生物学技术 细胞分离技术 细胞培养与细胞杂交 第四页，共三十五页，2022年，8月28日 一、显微技术 显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同，可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。 第五页，共三十五页，2022年，8月28日 普通光学显微镜 第六页，共三十五页，2022年，8月28日 荧光显微镜 细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光 第七页，共三十五页，2022年，8月28日 荧光显微镜照片 （微管呈绿色、微丝红色、核蓝色） 第八页，共三十五页，2022年，8月28日 激光共聚焦扫描显微镜 第九页，共三十五页，2022年，8月28日 蓝色为细胞核 绿色为微管 激光共聚焦扫描显微镜用激光作扫描光源，由于激光束的波长较短，光束很细，所以共焦激光扫描显微镜有较高的分辨力，大约是普通光学显微镜的3倍。 调焦深度不一样时，就可以获得样品不同深度层次的图像，这些图像信息都储于计算机内，通过计算机分析和模拟，就能显示细胞样品的立体结构。 第十页，共三十五页，2022年，8月28日 暗视野显微镜 照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。 利用这种显微镜能见到小至 4~200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高50倍。 第十一页，共三十五页，2022年，8月28日 ????? 相差显微镜 把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。 这种显微镜最大的特点是可以观察未经染色的标本和活细胞。 一种介壳虫的染色体 第十二页，共三十五页，2022年，8月28日 微分干涉差显微镜 优点是能显示结构的三维立体投影影像，使细胞的结构，特别是一些较大的细胞器，如核、线粒体等，立体感特别强，适合于显微操作。 目前像基因注入、核移植、转基因等的显微操作常在这种显微镜下进行。 第十三页，共三十五页，2022年，8月28日 倒置显微镜 用于观察培养的活细胞 第十四页，共三十五页，2022年，8月28日 透射电子显微镜 1932年Ruska发明了以电子束为光源，用电磁场作透镜的电子显微镜 。 电子显微镜的放大倍数最高可达近百万倍 透射电子显微镜 扫描电子显微镜 第十五页，共三十五页，2022年，8月28日 RER的形态 第十六页，共三十五页，2022年，8月28日 显微操作/注射仪 第十七页，共三十五页，2022年，8月28日 二、生物化学与分子生物学技术 细胞化学技术 组织化学或细胞化学染色：是利用染色剂可同细胞的某种成分发生反应而着色的原理，对某种成分进行定性或定位研究的技术。 利用这种方法对细胞的各种成分几乎都能显示，包括有无机物、醛、蛋白质、糖类、脂类、核酸、酶等。 第十八页，共三十五页，2022年，8月28日 免疫细胞化学 根据免疫学原理，利用抗体同特定抗原专一结合，对抗原进行定位测定的技术。 如果将抗体结合上标记物，再与组织中的抗原发生反应，即可在光镜或电镜下显示出该抗原存在于组织中的部位。 常用的标记物有荧光素和酶。 荧光素标记的称为免疫荧光法 酶标记的称为酶标免疫法 第十九页，共三十五页，2022年，8月28日 显微光谱分析技术 细胞中有一些成分具有特定的吸收光谱，核酸、蛋白质、细胞色素、维生素等都有自己特征性的吸收曲线。例如，核酸的吸收波长为260nm，而蛋白质的则为280nm。根据细胞成分所具有的这种特性，可利用显微分光光度计对某些成分进行定位、定性，甚至定量测定 第二十页，共三十五页，2022年，8月28日 放射自显影术 用于研究标记化合物在机体、组织和细胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用机理、作用部位等等。 原理是将放射性同位素（如14C和3H）标记的化合物导入生物体内，将标本制成切片或涂片，涂上卤化银乳胶，组织中的放射性即可使乳胶感光。显示还原的黑色银颗粒，即可得知标本中标记物的准确位置和数量。 第二十