灰葡萄孢菌AUR1基因真核表达载体的构建、表达及酶活性分析.docx

78 78 生 物 工 程 学 报 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn 邱永春 等/灰葡萄孢菌 AUR1 基因真核表达载体的构建、表达及酶活性分析 January 25, 2013, 29(1): 78-86 ?2013 Chin J Biotech, All rights reserved 农业生物技术 农业生物技术 灰葡萄孢菌 AUR1 基因真核表达载体的构建、表达及 酶活性分析 邱永春，刘小平，苟萍 新疆大学生命科学与技术学院，新疆 乌鲁木齐 830046 邱永春, 刘小平, 苟萍. 灰葡萄孢菌 AUR1 基因真核表达载体的构建、表达及酶活性分析. 生物工程学报, 2013, 29(1): 78-86. Qiu YC, Liu XP, Gou P. Construction, expression and enzymatic activity analysis of AUR1 eukaryotic expression vector of Botrytis cinerea. Chin J Biotech, 2013, 29(1): 78-86. 摘 要: 为了研究灰葡萄弛菌肌糖磷脂酷神经酷胶合成晦 (BcAUR1 基因) 的表达及晦活性，采用 RT-PCR 方 法，利用含有 FLAG 标签以及 BamHⅠ 、XhoⅠ晦切位点的 AUR1 特异引物从灰葡萄弛菌中扩增得到 BcAUR1 基因。将 BcAUR1 基因与穿梭质粒 pYES2 重组， 得到 pYES2-BcAUR1 质粒采用醋酸钮转化法导入酿酒酵母尿 嗦吭突变菌株 Δyor1 中，Western blotting 检测肌糖磷脂酷神经酷胶 (IPC) 合成晦表达， HPLC 检测 IPC 合成晦 活力。结果显示 pYES2-BcAUR1 在酿酒酵母尿嗦吭突变菌株 Δyor1 中获得表达， pYES2-BcAUR1 转化子 IPC 合成晦活性显著增高，比空载转化子约提高 1 倍。低浓度的 AbA 能够抑制空载 pYES2 酵母转化子生长，但 pYES2-BcAUR1 酵母转化子能抵抗 AbA 对菌体生长的抑制。 关键词 : pYES2 穿梭载体，灰葡萄弛菌，肌糖磷脂酷神经酷胶合成晦， 短梗霉素 A， 晦活力 Construction, expression and enzymatic activity analysis of AUR1 eukaryotic expression vector of Botrytis cinerea Yongchun Qiu, Xiaoping Liu, and Ping Gou College of Life Science and Technology, Xinjiang University, Urumqi 830046, Xinjiang, China Abstract: In order to study the expression and the activity of inositol phosphorylceramide synthase (BcAUR1 gene) in Botrytis cinerea, we amplified BcAUR1 by RT-PCR from Botrytis cinerea, using the special primers with FLAG and BamHⅠ/XhoⅠrestriction sites. Recombinant pYES2-BcAUR1 was constructed to transform into Saccharomyces cerevisae Received: July 31, 2012; Accepted: September 17, 2012 Supported by: National Natural Science Foundation of China (No.. Corresponding author: Ping Gou. Tel: +86-991-8879585; E-mail: gou_ping@ 国家自然科学基金 (No. 资助。 79邱永春 等/灰葡萄孢菌 AUR1 基因真核表达载体的构建、表达及酶活性分析 79 Δyor1 by LiAC. The expression of inositol phosphorylceramide (IPC) synthase and its activity were detected by Western blotting