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Chapter 20 High Performance Liquid Chromatography (HPLC) 化学化工学院 杨 睿 第一部分 概述 第二部分 高效液相色谱仪 第三部分 HPLC的主要类型及色谱分离 方法的选择 §20 －1 概述 高 效 液 相 色 谱 法 (High Performance Liquid Chromatography, HPLC) ：用高压力输送流动相， 采用 高效固定相及 检测等 的液相色谱 法。 柱前压： 50～500 ·105 Pa ； 填充粒径：5～10 mm ； 1～3 mm n ： 5～6 ·104 ；1～3 ·105 一、HPLC的特点： 1. 与经典液相色谱法比较 固定相、输液设备、检测 2. 与气相色谱法比较 分析对象、流动相、操作条件 固定相粒径 理论塔板数 LC ： 100 ~ 200mm 3000 GC ： ：气体、 20%的有机物 （低级烃、石油化工） HPLC： 10mm 5 ~ 30 万 HPLC ：80%的有机物； 蛋白质、核酸、氨基酸、多糖类、植物色素、药 物、药用植物有效成分、高聚物、 。。。 3. HPLC的特点： 4 -1 分离效能高 （n=10 m ，柱效 » 一般LC） 选择性高 检测灵敏度高 分析速度快 重现性好 应用范围广 （可分析80%有机化合物 ） 局限性 ：缺乏通用检测器 ；设备费用昂贵；操作 严格 二、HPLC的分类：（按分离机制） m s m s 吸附色谱 分配色谱 m s m s - + 离子交换色谱 体积排阻色谱 三、正、反相色谱体系 正己烷 乙醚 乙酸乙酯 异丙醇 正相色谱：流动相是非极性, 固定相是极性的 流动相极性 固定相极性 水 甲醇 乙腈四氢呋喃 反相色谱：流动相是极性, 固定相是非极性的 流动相极性 固定相极性 正相色谱 反相色谱 固定相 硅胶、氧化铝 非