高中生物课件：分离以尿素为氮源的微生物.ppt

本实验尿素固体培养基上生长的菌落都是以尿素为氮源的微生物吗？ 思考与练习 2、有脲酶的细菌在生态稳态上起什么作用？ 如果土壤中有许多尿素，在自然界较高温度下就会被水解，水解后的NH3会使土壤变成碱性，NH3与其他阴离子物质如SO42－、CO32－、NO3－等形成化合物，则会使土壤板结。 有脲酶的细菌使植物废弃物和动物尸体降解，并利用了所形成的氨，有利于自然界中氮的循环。 实验2 分离以尿素为氮 源的微生物 细菌 尿素 NH3 中性 碱性 酚红颜色： 黄色 红色 (变色范围 pH6.4-8.2) 任务1：怎么从土壤中分离出它们呢？ 利用以尿素为唯一氮源 的培养基进行筛选。 配制培养基 尿素培养基 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g 酚红 0.25g 尿素 10ml 选择培养基 琼脂是未被纯化的混合物,内含一定量的含氮化合物 （1）将土壤中的固氮菌分离出来 （2）将土壤中自养微生物分离出来 举一反三 （3）筛选出抗青霉素的微生物 （4）筛选出耐高浓度食盐的微生物 …… 2、要验证以尿素为唯一氮源的培养基 对土壤中的细菌确实具有选择作用，你 该如何设计实验。 思考： 配制培养基 尿素培养基 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g 酚红 0.25g 尿素 10ml LB培养基 蛋白胨： 0.25g 酵母粉： 0.12g NaCl： 0.25g 琼脂糖： 0.5g 对照组 选择培养基 实验组 3、请你提供一种方法，判断分解 尿素的细菌确实能将尿素分解成氨。 思考： 方法：在以尿素作为唯一氮源的培养基 中加入酚红指示剂,接种培养该细菌，若 指示剂变红，说明该种菌分解了尿素。 二、实验目的: 使用专一培养基(含有尿素)分离专一的细菌 通过指示剂（酚红）颜色的变化检知脲酶催化的化学反应 三、实验中涉及到的一些问题： （一）哪些土壤中含有这种以尿素为氮源的微生物多？（选材的问题） （二）此实验用到的选择培养基必需含有哪些物质？ （三）可用什么指标认定不同土壤中选择出的微生物对尿素分解能力的高低？ 没硬化，腐殖质丰富的土壤 碳源、尿素、无机盐、水、酚红 培养基红色的深浅 三、实验中涉及到的一些问题： 重复性原则 对照原则 （排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验的可信度） （四）实验设计要遵循的原则： 过滤灭菌后的尿素 （二）制备细菌悬液 制备成10-2、10-3、10-4、10-5土壤稀释液 配制菌悬液 1个99ml无菌水 2个4.5ml无菌水 得10-2, 10-3, 10-4的菌悬液 1g土壤 倒平板 需要倒3个LB平板，9个尿素平板 LB(对照) 尿素 10-3 10-4 10-5 每个稀释度 1个LB对照平板 3个尿素平板(平行重复组) 接种 取0.1ml菌悬液 涂布分离 高浓度→低浓度，换枪头 低浓度→高浓度，可不用换枪头 涂布分离 37℃倒置培养 按浓度捆成一摞 恒温37℃培养 10-4 、 10-3,、 10-2