高中生物课件：动物的克隆W.ppt

动物的克隆 动物的细胞和组织培养是 动物克隆的技术基础 动物细胞培养、组织培养、器官培养 严格来说，从单个细胞开始、从组织开始、从器官（器官的原基、器官一部分或整个器官）开始的培养分别叫做细胞培养、组织培养、器官培养。 但三种培养都是以细胞为单位的，且长期培养的结果经常只能使单一类型的细胞保存下来，最终成了简单的细胞培养，所以三种培养一般统称为组织培养。 原代培养、传代培养 原代培养:即直接从体内取出细胞、组织和器官立即进行培养。 将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代培养。 为什么要进行传代培养？ 到一定时期培养的细胞就会因密度过大和代谢消耗引起营养枯竭，不能正常生长。 幼龄与老龄动物的组织细胞比较，分化程度低的与分化程度高的组织细胞比较，哪一种更易于培养？为什么？ 　细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切的关系，细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄动物细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老龄动物则相反。所以，一般来说幼年动物的组织细胞比老年动物的组织细胞易于培养。同样，组织细胞的分化程度越低，则增殖能力越强，所以更容易培养。 胰蛋白酶会把细胞消化掉吗？ 　胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。 　（0.25%胰蛋白酶浓度，在37℃下消化5mm3大小的胚胎类软组织需要20~30min。） 为什么动物细胞要分散成单个细胞培养？ 细胞原代培养时可以分散成单个细胞培养，也可以用细胞群（团）、组织块培养，经传代培养后，最终都为细胞培养。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　分散成单个细胞、细胞群（团）后容易培养，细胞所需的营养容易供应，其代谢废物容易排出；而用大块组织培养时，内部细胞的营养供应和代谢废物的排出都较困难，因此，这些细胞在体外长时间的生存和生长就较困难。同时，分散成单个细胞培养，可使得在细胞水平操作的其他技术得以实现。　　　　　　　　　　　　　　 细胞系、细胞株 细胞系：泛指可传代的细胞。 原代培养物经首次传代成功后即为细胞系。如果不能继续传代，或传代次数有限，可称为有限细胞系；如果可以连续培养，则称为连续细胞系。 细胞株：具有特殊性质的细胞系。 通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞系中获得。一般具有恒定的染色体组型、同工酶类型、病毒敏感性和生化特性等。 克隆培养法 定义: 细胞克隆的最基本要求－－－必须保证分离出来的细胞是一个而不是多个，即必须肯定所建成的克隆来源于单个细胞 容易克隆的细胞 提高细胞克隆形成率的措施 细胞克隆的最主要的用途 动物细胞培养的方法－－根据培养形态 贴壁培养：分散的细胞悬浮在培养瓶中很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁，贴壁后的细胞呈单层生长，单层培养的细胞保持接触抑制的特性。 悬浮培养：细胞在培养过程中不贴壁，一直悬浮在培养液中生长。培养条件较为复杂，难度也大，但是容易同时获得大量的培养细胞。为了制取细胞产品而设计的转鼓培养法，即属于悬浮培养。使用大容量的圆培养瓶，在培养过程中不断地转动，使培养的细胞始终处于悬浮状态之中而不贴壁。 接触抑制 细胞膜上有糖类和蛋白质共同构成的糖蛋白,也叫做糖被,他在细胞上起识别作用。 当细胞增殖到一定程度,也就是互相挨在一起的时候,糖蛋白识别了这种信息,就会使细胞停止继续繁殖,这种现象就叫做接触抑制。 杂交瘤技术制备单抗的最大优点是：可以从特异抗原成分比例极少的抗原混合物中获得单抗。单抗可作为特异探针，研究相应抗原蛋白的结构、细胞学分布及其功能。 根据分子细胞生物学机理可以说明克隆羊获得成功的部分原因：重组卵细胞最初分裂时虽然复制了DNA，但基因的转录并未开始；同时，供体核DNA开始丢失来源于乳腺细胞的调节蛋白，而正是这些调节蛋白最初阻止了核基因的表达；在重组卵细胞开始第三次时，原乳腺细胞的调节蛋白便全部被卵细胞质中的蛋白因子替换了，因此核DNA被重新编排，胚细胞开始表达自己的基因，进而调控胚在代孕母亲子宫中的进一步发育。因此，罗斯林研究所的科研人员采用电脉冲细胞融合技术，选择分裂3次时的细胞进行移植，并在核移植前对乳腺细胞进行特殊处理（血清饥饿法，以恢复体细胞核的全能性），以利于细胞核的一系列变化和细胞融合后基因表达的分子开关的启动。 （2009 浙江）用动、植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述正确的是 A.都需用CO2培养箱 B.都须用液体培养基 C.都要在无菌条件下进行 D.都可体现细胞的全能性 （2010浙江）下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是 A.培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞 B.克隆培养法培养过程中多数细胞的基因型会发生改变 C.二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的 D.恶性细胞系的细胞可进行传代