高中生物课件：动物细胞工程-动物细胞与组织培养-二轮复习.ppt

2、动物细胞、组织培养的培养液成分深度解读 （1）天然培养基（教材中提及的） 生理盐水、腹水及血清、淋巴液、血浆和鸡胚提取液 2、动物细胞、组织培养的培养液成分深度解读 （1）天然培养基： 你还想到了哪些其他的天然培养基成分？ 微生物培养中： 细菌培养——蛋白胨、酵母提取液 霉菌培养——豆芽汁 （2）教材中提及的人工培养基： 2、动物细胞、组织培养的培养液成分深度解读 （3）培养基的基本要求： 胰岛素 CO2培养箱、酸碱缓冲液 靠盐、糖等 植物：大量元素、微量元素、有机成分、激素 微生物：碳源、氮源、无机盐、水、生长因子 血清 植物组培：蔗糖； 原生质体：甘露醇； 醋化醋杆菌：甘露醇 微生物：无机盐 2、动物细胞、组织培养的培养液成分深度解读 （4）关于培养基中的血清： 根据各种细胞培养的需要，在配制人工合成培养基时，尚需加入一定量的天然合成培养液，构成最适合细胞生长的培养液，加入适量血清的生长液就是其中的一种。这种培养液主要为细胞生长增殖之用，所含血清比例较大。 一般配法：基础培养基80%--90%，小牛血清10%--20%，并加双抗生素（青霉素100U/mL，链霉素100μg/m1），上述比例如有特定需要，可根据细胞培养要求进行增减。 抑制杂菌生长 ①降低牛血清浓度：（至3%-2%） ②无血清培养基 使大多数供体细胞停留在G0/G1期（同步化）； 利于细胞核的一系列变化和细胞融合后基因表达的分子开关的启动 正常10%--20% 因血清所含成分复杂，同时也含有一些不可控因素，细胞毒性物质和抑制物，不仅影响细胞生长和细胞某些功能的表达，有的还会对细胞产生去分化作用，影响一些基础医学研究的结果。因此，一些技术要求和研究目的较高的细胞培养，如细胞生长因子研究和制备、单克隆抗体制备、细胞分泌产物的研究和制备等，都须用无血清培养基，以减少或去除异种蛋白及干扰因素。不仅对产品纯化提取有益，而且可避免异种血清所引起的过敏反应。 ②无血清培养基 需添加辅加成分，有： 促贴壁附着成分，如：纤维粘连蛋白，层粘连蛋白胶原等。 促生长增殖成分，如一些生长因子和激素。 蛋白酶抑制物，如大豆胰蛋白酶抑制剂 有需要时，大多数细胞可通过无血清培养基的培养，转变成可悬浮培养 3、动物细胞、组织培养的其他相关概念 有的细胞悬浮培养（血细胞、淋巴细胞） 大多数细胞为：贴壁生长（如成纤维细胞） 有需要时，大多数细胞可通过无血清培养基的培养，转变成可悬浮培养 是指组织块接种进行细胞培养5～6天后，把培养瓶置于倒置相差显微镜下观察，可见到有细胞从组织块周边生长，呈放射状排列。 取组织 单个细胞悬浮液 原代培养 细胞系 原代培养物 传代培养 消化 4、动物细胞、组织培养的过程 筛选 细胞株 ①原代培养VS传代培养 ②有限细胞系VS连续细胞系 概念比较 该技术的目的？样品特点？ 消化方式、原理、场所、注意事项？ 细胞培养瓶的特点、培养液的成分、培养的场所？ 何时如何进行传代培养、传代培养的原因？ 细胞系的分类？如何培养得到细胞株？ 箱的作用、气体特点？ 5、动物细胞、组织培养的结果 概念比较 ③ 细胞系VS细胞株 选择法或 克隆培养法 6、克隆培养法 ？ 如何获得单细胞？ 软琼脂法、有限稀释法（多孔培养皿）