SC_T 7016.13-2019CN 鱼类细胞系 第13部分：鲫细胞系(CAR).docx

ICS 65.150 B 50 中 华 人 民 共 和 国 水 产 行 业 标 准 SC/T 7016.13—2019 鱼类细胞系 第13部分：鲫细胞系(CAR) Fish cell lines—Part 13:Carassius auratus cell line(CAR) 2019-08-01 发布 2019-11-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 I SC/T 7016.13—2019 前 言 SC/T 7016《鱼类细胞系》为分部分标准，拟分为如下部分： ——第1部分：胖头鐵肌肉细胞系(FHM); ——第2部分：草鱼肾细胞系(CIK); ——第3部分：草鱼卵巢细胞系(CO); —第4部分：虹鳟性腺细胞系(RTG-2)。 ——第5部分：鲤上皮瘤细胞系(EPC); ——第6部分：大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(CHSE); ——第7部分：棕鲫细胞系(BB); ——第8部分：斑点叉尾鲫卵巢细胞系(CCO); ——第9部分：蓝鳃太阳鱼细胞系(BF-2); ——第10部分：狗鱼性腺细胞系(PG); ——第11部分：虹鳟肝细胞系(R1); ——第12部分：鲤白血球细胞系(CLC); ——第13部分：鲫细胞系(CAR); -—第14部分：锦鲤吻端胚细胞系(KS); 本部分为 SC/T 7016 的第13部分。 本标准按照GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由农业农村部渔业渔政管理局提出。 本部分由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC 156)归口。 本部分起草单位：北京市水产技术推广站、中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所。 本部分主要起草人：徐立蒲、景宏丽、王姝、曹欢、潘勇、张文、王静波、王小亮、那立海、江育林。 1 SC/T 7016.13—2019 鱼类细胞系 第13部分：鲫细胞系(CAR) 1 范围 本部分规定了鲫细胞系的术语和定义，缩略语，试剂与材料，器材与设备，细胞形态、大小与特性，细胞 培养条件，细胞传代与保存，质量检查。 本部分适用于CAR 的培养、使用和保藏。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 鲫细胞系 carassius auratus cell line,简称CAR 来源于ATCC(American Type Culture Collection),编号 CCL-71,该细胞系于1964年由Clem 建立。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 ADIV: 大鲵虹彩病毒(andrias davidianus iridovirus) BIV:玻勒虹彩病毒(bohle virus) EHNV: 流行性造血器官坏死病毒(epizootic haematopoietic necrosis virus) GCRV: 草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus) 5 试剂与材料 5.1 水 应符合GB/T 6682 中一级水的规定。 5.2 细胞培养液 配制方法参见附录A 或使用商品化试剂。 6 器材与设备 主要包括： a) 生化培养箱； b) 超净工作台； c) 倒置显微镜； d) 液氮罐； e) 细胞培养瓶、移液管等耗材。 7 细胞形态、大小与特性 7.1 形态 2 SC/T 7016.13—2019 上皮样细胞，细胞呈纤维状(参见附录 B)。 7.2 大小 经细胞实时分析系统测定细胞悬浮后的平均直径约14.0 μm (参见附录C)。 7.3 特性 7.3.1 生长特性 贴壁生长，8h 内细胞贴壁并生长；18h 后能基本长满单层细胞。 7.3.2 对部分水生动物病毒的敏感性 对GCRV、EHNV、ADIV 和 BIV 等病毒敏感(参见附录 B)。 8 细胞培养条件 细胞置生化培养箱内，在15℃~25℃下培养，最适生长温度为25℃。 9 细胞传代与保存 9.1 传代 9.1.1 吸弃 置超净工作台内，无菌环境下吸弃长满单层CAR 细胞培养瓶中的旧培养液。 9.1.2 消化和分散 沿细胞培养瓶一侧加入细胞消化液， 一般在25 cm2 细胞培养瓶中加入1mL～2mL, 或按照细胞培养 瓶培养面每平方厘米加入0.1mL。 贴壁长满的CAR 消化时间一般为2min～3 min,细胞开始呈雾状之 后吸弃细胞消化液，拍打培养瓶以分散细胞。 9.1.3 分瓶 将消化液吸弃后，在25cm2 细胞培养瓶中，加入10 mL 细胞培养液，振荡摇