SC_T 7016.14-2019CN 鱼类细胞系 第14部分：锦鲤吻端细胞系(KS).docx

ICS 65.150 B 50 SC 中华人民共和国水产行业标准 SC/T 7016.14—2019 鱼类细胞系 第14部分：锦鲤吻端细胞系(KS) Fish cell lines—Part 14:Koi snout cell line (KS) 2019-08-01 发布 2019-11-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 I SC/T 7016.14—2019 前 言 SC/T7016 《鱼类细胞系》为分部分标准，拟分为如下部分： ——第1部分：胖头鳞肌肉细胞系(FHM); ——第2部分：草鱼肾细胞系(CIK); ——第3部分：草鱼卵巢细胞系(CO); ——第4部分：虹鳟性腺细胞系(RTG-2); ——第5部分：鲤上皮瘤细胞系(EPC); ——第6部分：大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(CHSE); ——第7部分：棕蛔细胞系(BB); ——第8部分：斑点叉尾鲷卵巢细胞系(CCO); ——第9部分：蓝鳃太阳鱼细胞系(BF-2); --—第10部分：狗鱼性腺细胞系(PG); ——第11部分：虹鳟肝细胞系(R1); ——第12部分：鲤白血球细胞系(CLC); ——第13部分：鲫细胞系(CAR); ——第14部分：锦鲤吻端胚细胞系(KS); 本部分为 SC/T 7016 的第14部分。 本部分按照GB/T1.1—2009 给出的规则起草。 请注意文本的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由农业农村部渔业渔政管理局提出。 本部分由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC 156)归口。 本部分起草单位：中国水产科学研究院珠江水产研究所。 本部分主要起草人：王庆、王英英、曾伟伟、李莹莹、尹纪元、刘春、任燕、常藕琴、石存斌。 SC/T 7016.14—2019 鱼类细胞系 第14部分：锦鲤吻端细胞系(KS) 1 范围 本部分规定了锦鲤吻端细胞系的术语和定义、缩略语、试剂和耗材、器材和设备、细胞形态与特性、细 胞培养条件、细胞传代和保存、质量检查。 本部分适用于锦鲤吻端细胞系的培养、使用和保藏。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 锦鲤吻端细胞系 koi snout cell line(KS) 2011年，用锦鲤的吻端组织经原代培养、衍生的连续细胞系。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 GCRV: 草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus) KHV: 锦鲤疱疹病毒(koi herpesvirus) 5 试剂和材料 5.1 水 应符合GB/T 6682 中一级水的规定。 5.2 细胞培养液 配制方法参见附录 A.1。 5.3 细胞消化液 配制方法参见附录 A.2。 5.4 PBS 缓冲液 配制方法参见附录 A.3。 5.5 细胞冻存液 配制方法参见附录 A.4。 5.6 血清 胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS)。 5.7 试剂耗材 细胞培养瓶、移液器、移液管以及冻存管等培养细胞所用的耗材。 6 器材和设备 6.1 培养箱(可恒温27℃)。 2 SC/T 7016.14—2019 6.2 超净工作台。 6.3 生物安全柜。 6.4 倒置显微镜 6.5 细胞计数仪 6.6 液氮冻存罐， 7 细胞形态与特性 7.1 形态 为上皮细胞，细胞呈椭圆形(参见附录B 中图B.1)。 7.2 大小 经细胞实时分析系统测定细胞悬浮后的平均直径约13.5 μm (参见附录C)。 7.3 特性 7.3.1 生长特性 贴壁生长，传代后10h 内细胞贴壁，24 h 后能基本长满单层细胞。 7.3.2 对部分水生动物病原的敏感性 KS 对 KHV,GCRV 等病毒敏感，KS 接种KHV 后，置于22℃培养，3 d~4d, 细胞出现空泡状 CPE, 5d~7d, 细胞单层呈网状；接种GCRV 后，置于27℃培养，4d~5d, 细胞出现融合性病变，随培养时间的 延长，细胞逐渐脱落，接种后的CPE 形态参见图B.2 和 B.3。 8 细胞培养条件 8.1 培养温度 细胞置于生化培养箱内，在15℃~32℃下培养，最适生长温度为27℃, 9 细胞传代和保存 9.1 传代 9.1.1 吸弃 挑选长满单层KS 细胞的培养瓶，置超净工作台内，吸出旧培养液。 9.1.2 消化和分散 用细胞消化液消化分散细胞。沿细胞培养瓶一侧加入细胞消化液， 一般在25 cm2 细