复方中药治疗流行性腹泻病毒感染猪的消化道黏膜电镜观察及相关酶检测-《江苏农业科学》(2017年17期).docx

龙源版权所有 复方中药治疗流行性腹泻病毒感染猪的消化道黏膜电镜观察及相关酶检测作者：杨云乔 郑建高 姜军华 黄旭伟 汤里平 尚秋辰 谢鑫峰 张友敏 金文杰 许小琴来源：《江苏农业科学》2017年第17期 摘要：选取12～20日龄感染流行性腹泻病毒腹泻猪，采用复方中药和西药抗生素进行临床治疗，治疗结束后取胃底部、十二指肠中段、空肠中段、回肠中段和结肠中段，通过场发射扫描电镜和透射电镜对比观察消化道病变；取回肠，通过免疫组化法检测琥珀酸脱氢酶、单胺氧化酶、5′-核苷酸酶和Na+-K+-ATP酶活性变化。场发射扫描电镜观察结果表明，中药治疗猪未见异常，西药治疗猪十二指肠黏膜表面见少量黏附的大肠杆菌。透射电镜观察结果表明，中药治疗猪细胞结构接近正常，无严重细胞损伤，但细胞微丝管、骨架等结构不如健康猪清晰；西药治疗猪消化道可见内质网损伤，内质网和高尔基体断裂，核形态和核染色质异常。琥珀酸脱氢酶、单胺氧化酶和Na+-K+-ATP酶检测结果均为中药治疗猪酶活性显著高于西药治疗猪。由结果可以推测，复方中药治疗猪流行性腹泻的良好效果可能与保护线粒体、稳定细胞结构、稳定膜结构、调整酶活性和抗继发感染有关。 关键词：猪流行性腹泻；复方中药；消化道黏膜；电镜观察；琥珀酸脱氢酶；单胺氧化酶；Na+-K+-ATP酶 中图分类号： S858.285.3文献标志码： A文章编号：1002-1302（2017）17-0159-05 通信作者，许小琴，博士，教授，主要从事中兽医学相关研究。E-mail：xuxq@yzu.edu.cn。猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea，简称PED）是猪病毒性腹泻病，可引起仔猪高死亡率、成年猪掉膘和饲料报酬率降低，给养猪业带来巨大的经济损失。目前对PED的防治主要通过接种疫苗、注射卵黄抗体和应用传统西药，但效果较差，因此，应用中药治疗PED成为热门的研究方向。笔者所在实验室之前的研究结果（未见刊）表明，中药治疗组平均442 d治愈，治愈率达86.67%，复发率为0，体质量最大下降0.59%，11 d增质量22.44%；西药对照组平均4.91 d治愈，治愈率达84.61%，复发率为7.69%，体质量最大下降508%，与中药组相比差异性极显著（P 1材料与方法 1.1试验材料 1.1.1药物、试剂和仪器中药材：80 g白头翁、80 g黄芩、50 g秦皮、60 g党参、50 g苍术、30 g甘草、40 g当归、50 g肉桂、50 g厚朴、60 g诃子、50 g山楂，均购自江苏省溧阳市时珍中医药有限公司。 庆大霉素、环丙沙星、乙酰甲喹、林可霉素，均购自上海公谊兽药厂。 抗体试剂：Mouse/Porcine 5′-Nucleotidase/CD73 Affinity Purified PAb（25 μg）、Donkey Anti-Sheep IgG HRP Affinity Purified PAb（1 mL），均购自美国R&D Systems Inc；ANTI-Na+/K+ATPASE，α1 50 μg，购自德国达姆施塔特默克集团；Mouse IHC Kit[免疫组化试剂盒（一抗小鼠来源）]、Rabbit IHC Kit[免疫组化试剂盒（一抗兔来源）]，均购自中国福麦斯生物技术有限公司；琥珀酸脱氢酶复合体B亚基抗体（SDHB Antibody）（FL-280）、单胺氧化酶A/B抗体（MAO-A/B Antibody）（H-50），均购自美国Santa Cruz公司。 仪器：RM2016轮转式切片机、13395H2X显微镜和EM CPD300全自动临界点干燥仪，均购自德国莱卡集团；108Auto高性能离子溅射仪，购自英国Cressington Scientific Instruments Ltd；S-4800II场发射扫描电镜，购自日本日立集团；CM100透射电子显微镜，购自荷兰飞利浦集团；101C-2型电热鼓风干燥箱，购自上海昕仪仪器仪表有限公司；BCD-290 W冰箱，购自中国海尔集团。 1.1.2试验动物选择江苏省溧阳市某猪场仔猪按常规免疫程序接种疫苗的12～20日龄腹泻仔猪，取肛门拭子经扬州大学微生物实验室檢测，猪流行性腹泻病毒检出率为40%，猪轮状病毒和猪传染性胃肠炎病毒均为阴性。 选择1头江苏省仪征市某无腹泻疾病流行史猪场23日龄健康仔猪，取肛门拭子经扬州大学微生物实验室检测，猪流行性腹泻病、猪轮状病毒、猪传染性胃肠炎病毒均为阴性，作为健康对照猪。 1.2试验方法 1.2.1分组和用药情况从溧阳市该猪场取56头腹泻仔猪按同窝，以及质量、日龄相近的原则分成2组，其中30头用中药治疗，26头用西药治疗。复方中药加水煎煮2次合并滤液浓缩到 1 000 mL 后灌服，0.75