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无菌试验用培养基的适用性检查标准操作规程
1 菌种
试验用菌株多少传代次数不得超过 5 代 (从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第 0 代),
并采用适宜的菌种保藏技术进行保存,以保证试验菌株的生物学特性。
检定菌种类 菌种号 检定菌种类 菌种号
金黄色葡萄球菌 【CMCC(B)26 003 】 枯草芽胞杆菌 【CMCC(B)63 501 】
铜绿假单胞菌 【CMCC(B)10 104 】 生孢梭菌 【CMCC(B)64 941 】
白色念珠菌 【CMCC(F)98 001 】 黑曲霉 【CMCC(F)98 003 】
2 菌液制备
金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌
金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、 枯草芽孢杆菌的新鲜培养物接种至胰酪大豆胨液体
培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上, 生孢梭菌的新鲜培养物接种至硫乙醇酸盐流体
培养基中,于 30~35℃培养 18~24 小时;上述培养物用无菌氯化钠 - 蛋白胨缓冲液
或%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液。
白色念珠菌
白色念珠菌的新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖液体培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基上,
于 20~25℃培养 24~48 小时。上述培养物用无菌氯化钠 - 蛋白胨缓冲液或 %无菌氯化
钠溶液制成适宜浓度的菌悬液。
黑曲霉
黑曲霉的新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基上,于 20~25℃培养 5~7 天。加
入 3~5ml 含%(ml/ml )聚山梨酯 80 的无菌氯化钠 - 蛋白胨缓冲液或 %无菌氯化钠溶液,
将孢子洗脱,然后,采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内,用含 % (ml/ml )聚
山梨酯 80 的无菌氯化钠 - 蛋白胨缓冲液或 %无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液。
备注:菌悬液若在室温下放置,应在 2 小时内使用,若保存在 2~8℃可在 24 小时内
使用;黑曲霉的孢子悬液可保存在 2~8℃,在验证过的储存期内使用。
3 无菌试验用培养基的适用性检查
具体方法
培养基名称 胰酪大豆胨液体培养基 硫乙醇酸盐流体培养基
培养温度 20~25℃ 30~35℃
无菌性检查 每批培养基随机取不少于 5 支( 瓶) ,置各培养基规定的温
试验用菌株 枯草芽胞杆菌、白色念珠菌、 金黄葡萄球菌、铜绿假单孢
灵敏度检
培养基装量 9ml/ 管 12ml/ 管
查
培养时间 5 天 3 天
接种方法
分别接种各试验用菌悬液于该培养基( 2 支)中,接种量小于 100cfu ;另 1 支不接种
作为空白对照,逐日观察。
判断依据
空白对照管应无菌生长, 若加菌的培养基管均生长良好, 判该培养基的灵敏度检查符
合规定。
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