农药残留的速测技术.ppt

农药残留的速测技术 农药残留是指农药使用后残存于环境、生物体和食品中的农药母体衍生物、代谢物、降解物和杂质的总称。造成蔬菜农药残留量超标的主要是一些国家禁止在蔬菜生产中使用的有机磷农药和氨基甲酸酯类农药，如甲胺磷、氧化乐果、甲拌磷、对硫磷、甲基对硫磷等。食用含有大量高毒、剧毒农药残留引起的食物会导致人、畜急性中毒事故。长期食用农药残留超标的农副产品，虽然不会导致急性中毒，但可能引起人和动物的慢性中毒，导致疾病的发生，诱发癌症，甚至影响到下一代。 农残检测必要性 随着农业产业化的发展，农产品的生产越来越依赖于农药、抗生素和激素等外源物质。我国农药在粮食、蔬菜、水果、茶叶上的用量居高不下，而这些物质的不合理使用必将导致农产品中的农药残留超标，影响消费者食用安全，严重时会造成消费者致病、发育不正常，甚至直接导致中毒死亡。农药残留超标也会影响农产品的贸易。 1、农药残留速测卡 检测原理 胆碱酯酶可催化靛酚乙酸酯（红色）水解为乙酸与靛酚（蓝色），有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱酯酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。 表面测定法（粗筛法） 1. 擦去蔬菜表面泥土，滴 2-3 滴洗脱液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。 2. 取一片农药残留检测 卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。 3. 放置 10min 以上进行预反应，预反应后的药片表面必须保持湿润。 4. 将农药残留检测卡对折，用手捏 3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。 5. 每批测定应设一个纯净水的空白对照卡。 整体农药残留检测法 1. 选取有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成 1cm左右见方碎片，取 5g 放入带盖瓶中，加入 10mL 纯净水，震摇 50 次，静置 2min 以上。 2.取一片农药残留检测卡，用白色药片沾取提取液，放置 10min 以上进行预反应，预反应后的药片表面必须保持湿润。 3.将农药残留检测卡对折，用手捏 3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。 4.每批农药残留检测应设一个纯净水的空白对照卡。 农药残留检测结果判定： 与空白对照卡比较，白色药片不变色或略有浅蓝色均为阳性结果（不合格），不变蓝为强阳性结果，说明农药残留量较高，显浅蓝色为弱阳性结果，说明农药残留量相对较低。白色药片变为天蓝色或与空白对照卡颜色相同，为阴性结果（合格）。对阳性结果的样品，可用其它分析方法进一步确定具体农药品种和含量。 检测下限 农药残留速测卡对几种常用农药的最低检测限如下： 甲胺磷1.7乙酰甲胺磷3.5 水胺硫磷3.1对硫磷1.7 乐果1.3久效磷2.5 马拉硫磷2.0敌敌畏0.3 敌百虫0.3呋喃丹0.5 西维因2.5好年冬1.0 氧化乐果2.3 2、霉抑制率（分光光度法） 检测原理 .在一定条件下,有机磷和氨基甲酸酯农药对人体胆碱酯酶正常功能有抑制作用,其抑制率与农药浓度呈正相关.正常情况下,酶催化神经传导代谢产物(乙酰胆碱)水解,其水解产物与显色剂反应,产生黄色物质,通过测定412纳米处吸光度随时间的变化值,计算出抑制率.通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在. 酶抑制法即用有机磷农药来抑制酶，使本可以由酶参与的显色反应失去颜色，而呈白色。抑制率即指有机磷农药抑制酶能力的强弱表示。? 一、试剂配制 1. 缓冲液试剂：整包倒入大烧杯中，加1000mL纯净水溶解，酸碱度为pH8.0，常温保存； 2. 乙酰胆碱酯酶：取一支酶粉加20mL缓冲溶液溶解，4℃冰箱中保存，一周内用完。也可将溶解后的酶液分成几个小瓶，将其冷冻，用时融化，但不能重复多次冷冻、化解。 3. 显色剂：取一支显色剂加入20mL缓冲溶液，避光保存； 4. 底物：取一支底物加20mL缓冲溶液，摇匀后置4℃冰箱中保存； 二、分析步骤 1. 样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，取样品1g，（非叶菜类取2g）放入烧杯或提取瓶中，加入5mL缓冲溶液，手摇振荡1～2分钟，或超声波振荡30秒钟，倒出提取液，静置3~5min，待用。 2. 对照溶液测试： 先于试管中加入100微升酶液和100微升显色剂，再加入2.5mL缓冲溶液，摇匀后于37°C放置15min，加入100微升底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录初始吸光度A1和反应3 min时的吸光度A2，A2-A1=DA0。3. 样品溶液测试：先于试管中加入100微升酶液和100微升显色剂，再加入2.5mL样品提取液，其它操作与对照溶液测试相同，记录初始吸光度A1和反应3 min时的吸光度A2，A2-A1=DAt。? 三、结果计算? 结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。抑制率