GB/T 36845-2018柑橘顽固病螺原体检疫鉴定方法.pdf

ICS 65.020.01 B 16 OB 中华人民共和国国家标准 GB/T 36845—2018 柑橘顽固病螺原体检疫鉴定方法 Detection and identification of Spiroplasma citri Saglio et al 2018-09-17 发布 2019-04-01 实施 发布 GB/T 36845—2018 ■ r ■ —— 刖 弓 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC 271)提出并归口。 本标准负责起草单位：中华人民共和国南海出入境检验检疫局、中华人民共和国广东出入境检验检 疫局、中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国烟台出入境检验检疫局、中华人民共和 国湖南出入境检验检疫局。 本标准主要起草人:谈垢、李凯兵、刘海军、张京宣、李金庆、周慧平、刘晓红、李贺。 T GB/T 36845—2018 柑橘顽固病螺原体检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了进境植物检疫中柑橘顽固病螺原体Spiroplasma citri Saglio et al的检疫鉴定方法。 本标准适用于进出境中的葡萄柚、柠檬、橘子、橙和酸性橙等柑橘属植物种果，苗木及昆虫介体等柑 橘顽固病螺原体的检疫鉴定。 2基本信息 中文名：柑橘顽固病螺原体 学塔：Spiroplasma citri Saglio et al 英文名:Critus stu orn disease,Little leaf disease of citrus,Stu orn disease of citrus 英文缩写:CSD 分类地位:属植物支原体类病原,细菌域(Bacteria),柔壁菌门(Ibnericutes),柔膜菌纲(Mollicutes),虫 原体目(Entomoplasmatales),螺原体科(Spiroplasmataceae) ,螺原体属｛Spiroplasma )。 柑橘顽固病螺原体的其他信息参见附录A。 3方法原理 根据柑橘顽固病螺原体的生物学特性、特异性引物PCR扩增及序列测定结果，荧光定量PCR检测 结果确定病原物种类。 4仪器设备和主要试剂 4.1主要仪器设备 普通PCR仪、荧光PCR仪、超净T作台、灭菌锅、制冰机、核酸蛋白分析仪、高速冷冻离心机、台式 小型离心机、超低温冰箱、常规冰箱、旋涡震荡器、微量进样器 、电泳仪、凝胶成像系统、显微镜。 4.2主要试剂和培养基 除另有规定外，所有试剂均为分析纯 。PCR缓冲液、dNTPs (dATP, dTTP. dCTP. dGTP). Go Tag DNA聚合酶、引物和探针。 检验中用到的LD8培养基配制方法见附录Do 5检测鉴定方法 5.1症状观察 仔细观察柑橘种苗、果实、叶片等，症状描述参见附录A。 1 GB/T 36845—2018 5.2病原菌的分离培养 柑橘叶条洗净后用75%乙醇