木霉固态菌种生产技术规程.doc

ICS? FORMTEXT 65.080 FORMTEXT B 13 FORMTEXT ????? DB FORMTEXT 32 FORMTEXT 江苏省地方标准 DB FORMTEXT 32/T XXXX— FORMTEXT 2019 FORMTEXT ????? FORMTEXT 木霉固态菌种生产技术规程 FORMTEXT Technical regulation for production of solid Trichoderma spp. spawn FORMTEXT ?????（报批稿） FORMTEXT ????? FORMTEXT 2019 - XX - XX发布 FORMTEXT 2019 - XX - XX实施 FORMTEXT 江苏省市场监督管理局???发布 DB32/T XXXX—2019 PAGE 8 前??言 本标准按GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由南京农业大学提出并归口。 本标准起草单位：南京农业大学。 本标准主要起草人：沈其荣、刘东阳、黄启为、李荣、凌宁。 木霉固态菌种生产技术规程 范围 本标准规定了木霉固态菌种生产中所涉及的生产场地要求、生产流程、产品检测、建立生产档案、包装及贮存运输要求等技术环节。 本标准适用于木霉固态菌种的生产。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 191 包装储运图示标志 GB 3095 环境空气质量标准 GB 3838 地表水环境质量标准 GB 20287 农用微生物菌剂 NY/T 883 农用微生物菌剂生产技术规程 术语与定义 下列术语和定义适用于本文件。 固态菌种 solid spawn 生长在固态培养基料上的菌种。 微生物接种剂 microbial inoculant 一种或一种以上的目的微生物经工业化生产增殖后直接使用，或经浓缩或经载体吸附而成的活菌制品。 固体培养基 solid medium 以富含木质纤维素或淀粉类天然物质为主要原料，添加适量的有机氮源及无机盐类，具一定水分含量的培养基。 生产场地要求 生产基地选择 生产基地应远离居住区、城区等，并且交通便利，生态环境优良，周边植被覆盖率高。生产地块集中连片并位于原料收集区较近的地方。车间保温保湿性能良好，同时具备通风性能。 生产环境 厂区空气质量达到大气环境质量标准GB 3095中II类标准要求。 发酵用水达到地表水质量标准GB 3838中III类水质要求，冷却水及其他用水应达到标准IV类水质要求。 生产车间 原料库 原料库要求水电方便，平坦干燥、通风良好，光照充足、空旷宽阔，远离火源，注意防火设施的建设。 接种室 接种室必须设缓冲间，通风和保温性能良好，并具有防尘换气性能，墙内壁和屋顶光滑，必须做好杀菌消毒工作，确保接种室环境的相对无菌。 培养室 培养室内壁和屋顶光滑，便于清洗与消毒，有条件的单位可以建设半地下室的培养室，或者将培养室墙壁加厚，有利于培养室的控温。 检验室 检验室宜留出便于检验仪器设备安装的场所，同时水电布局要求合理，建立车间环境卫生制度，定期对生产设备和环境消毒的。 生产流程 技术环节 木霉固态菌种主要包括木霉高密度液体发酵、固体基质准备、接种木霉液体菌种、固体发酵的控制、固态菌种后处理、产品包装、质量检测及出厂等技术环节。具体工艺流程见附录A。 菌种要求 原种 原种是生产用菌种的母种，对原种有如下要求： ——原种应有菌种鉴定报告。 ——原种应有菌种的企业编号、来源信息等。 菌种保管 采用固体曲保藏和冻干管保藏的方法保藏木霉固体孢子，确保无杂菌污染，菌种不退化。分类纯化并定期检查，建立菌种档案。 菌种质量控制 在进行生产之前，应对所使用的菌种进行检查，并确认其纯度和性能没有发生退化，如出现污染或者退化情况，该菌种不能作为生产用菌种，应该按照标准NY/T 883执行。 液体发酵增殖 木霉菌种的液体发酵增殖，按照NY/T 883执行。具体的培养基见附录B。 木霉菌丝体采用棉兰染色法观察：在载玻片中央滴加一滴无菌水，并将菌丝体均匀分布其中，盖上盖玻片，尽量不留气泡，从一侧滴加少量的棉兰染色液染色5 min，染色结束后用无菌水慢慢冲洗染色液，表面风干后在显微镜下观察，染色液配方具体见附录C。菌丝清晰可见，生长良好，没有出现杂菌污染，可以作为菌种继续使用；如果菌丝细小并呈不规则分布或者有杂菌污染，应按标准NY/T 883处理。 固体培养基制备 培养基要求 发酵培养基要求接种后木霉菌丝体生长旺盛，在保证有一定的生物量（菌丝体）的前提下兼顾分生孢子及有效代谢产物的产生。 原料要求来源充足、价格合理、营养成